福建省凡纳滨对虾养殖产业链中种质鉴定与水质调控技术的研究

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在凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)完整养殖产业链中,种质问题是制约我国凡纳滨对虾产业稳定发展的首要问题,优良种质是推动对虾产业优质高效的重要保障之一;此外,良种还需要良法,养殖管理特别是水质管理也非常重要,利用益生菌稳定养殖水环境,构建菌相调控体系,优化对虾养殖生态系统,也是对虾养殖产业链的重要研究内容之一。本文针对目前福建省凡纳滨对虾养殖产业链中存在的“良种”及“养殖良法”等关键问题,一方面,基于微卫星技术构建了分子种质鉴定与分析技术,拟对福建省的对虾苗种主产地—厦门市刘五店的对虾种质遗传结构及遗传多样性水平进行分析,旨在了解福建省对虾苗种生产的种质现状;另一方面,对福建省对虾养殖的特色养殖模式—池塘混养模式进行了水质调控技术的解析和创新,从对虾养殖池塘中分离筛选出能有效降解水体氨氮的原位芽孢杆菌(Bacillus),并优化了生产发酵配方,研发了低廉高产的生产性配方,为对虾池塘水质调控提供了重要技术保障。研究主要结果总结如下:1.厦门市养殖凡纳滨对虾亲本群体遗传多样性分析运用微卫星标记技术,选用8对微卫星引物对厦门市5个凡纳滨对虾亲虾群体(ZhaoAnl、HaiNan、ZhaoAn2、ZhangPu、DongShan)进行遗传多样性分析。结果显示,8对微卫星引物在5个凡纳滨对虾亲虾群体中共检测到75个等位基因,各群体的平均等位基因数(Na)为3.875~7.000、平均有效等位基因数(Ne)为2.632~3.719、平均PIC值范围在0.498~0.624。平均观测杂合度(Ho)为0.410~0.562、平均期望杂合度(He)为0.589~0.687。各群体的平均近交系数(Fis)为0.147~0.305,说明各群体内近交程度较高,存在杂合子缺失现象。除ZP群体与DS群体外,其他群体在多个微卫星位点上均显著偏离平衡(P<0.05),说明大部分群体存在杂合子缺失现象。遗传变异分析结果显示,各群体间的遗传分化指数(Fst)为0.028~0.199;根据Fst计算得到各群体间的Slatkin’s遗传距离在0.029~0.249之间。本研究结果表明,采自厦门市的5个凡纳滨对虾亲虾群体均存在不同程度的近交现象。本研究通过对厦门市5个凡纳滨对虾亲虾群体进行遗传多样性分析,旨在明确厦门市凡纳滨对虾亲虾群体的遗传结构,种质资源状况及近交程度,为该地区凡纳滨对虾种质资源的提纯、保优、复壮及遗传选育提供背景资料和建议。2.添加益生菌和复合营养剂对鱼虾混养池塘水质和细菌群落结构的影响通过向鱼虾混养池塘中添加益生菌和复合营养剂对养殖水环境进行生态调控,并评价其水质调控效果;运用Illumina HiSeq2500测序平台对养殖水体细菌多样性进行16S rDNA测序,获得其细菌组成及丰度信息。水质检测结果表明,在该调控方式下,透明度、pH、溶解氧(DO)、氨氮(NH3-N)及亚硝酸盐(N02-N)等参数变化幅度均在养殖鱼、虾适宜范围内,有害弧菌(Vibrio)的浓度远低于致病浓度,表明该水质调控方式能够维持养殖水环境稳定,抑制病原菌的繁殖。细菌群落组成及丰度分析结果显示,养殖水体得到的OTU数目为1878,其中,在界、门、纲、目、科、属、种上的OTU数目分别为4、43、79、91、652、952、16;养殖水体中相对丰度占主要优势的细菌微生物为蓝细菌门(Cyanobacteria)、变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)和厚壁菌门(Firmicutes),分别占总细菌的38.19%、28.11%、18.85%、12.85%、0.08%。研究结果表明,添加益生菌和复合营养剂后鱼虾混养池塘细菌群落结构多样性水平较高,含有多种水产养殖中的常用益生菌。本研究为鱼虾健康养殖和养殖水体生态环境的改善提供了理论依据。3.对虾养殖池塘一株有益芽孢杆菌的分离鉴定及其发酵配方的优化本实验在(28±1)℃下从对虾养殖池塘中分离筛选具有氨氮(包括游离氨NH3-N、铵盐NH4+)降解效果的芽孢杆菌,并采用单因素实验对筛选出的芽孢杆菌进行发酵配方优化,挑选出低廉高产的发酵培养基配方。菌株分离筛选及氨氮降解实验结果显示:经初步分离,得到5株芽孢杆菌(DSI、DS2、DS3、DS4、DS5),再通过氨氮降解实验得到一株能够显著降解水体氨氮的芽孢杆菌DS5,5天内菌株DS5对水体氨氮降解迅速,在第四天达到最大降解率(36.41±0.07)%,且最后3天水体氨氮持续稳定在36%左右;通过菌株16Sr DNA序列分析、形态学及生理生化鉴定,将菌株DS5初步鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。菌株DS5发酵配方实验结果表明:在28 ℃下,当碳源添加为5‰葡萄糖、氮添加为10‰豆粕、无机盐添加为5‰氯化钠时,菌株生长良好,培养基含菌数较高,综合考虑成本、菌含量等因素,选择5‰葡萄糖、10‰豆粕、5‰氯化钠作为该菌的最优发酵培养基配方。
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