【摘 要】
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侧孢短芽胞杆菌具有抗菌、杀虫、生物降解转化等功能,在生物防治、环境保护和微生物菌剂开发等方面有着巨大的应用价值和潜力。本文从侧孢短芽胞杆菌培养液中分离纯化出一种新的蛋白激发子PeBL2,它能引起烟草叶片过敏性反应。克隆并获得了激发子PeBL2的基因序列,成功实现了在大肠杆菌中的表达与纯化,具体的研究结果如下:通过硫酸铵沉淀、离子交换色谱和高效液相色谱(HPLC),从侧孢短芽胞杆菌A60发酵液中分离
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侧孢短芽胞杆菌具有抗菌、杀虫、生物降解转化等功能,在生物防治、环境保护和微生物菌剂开发等方面有着巨大的应用价值和潜力。本文从侧孢短芽胞杆菌培养液中分离纯化出一种新的蛋白激发子PeBL2,它能引起烟草叶片过敏性反应。克隆并获得了激发子PeBL2的基因序列,成功实现了在大肠杆菌中的表达与纯化,具体的研究结果如下:通过硫酸铵沉淀、离子交换色谱和高效液相色谱(HPLC),从侧孢短芽胞杆菌A60发酵液中分离纯化出一种新的蛋白激发子PeBL2,它可以引起典型的HR。采用电喷雾四极杆飞行时间串联质谱(ESI-Q-TOF-MS/MS)对PeBL2进行鉴定,获得的肽段与基因组中假想蛋白最匹配,命名为PeBL2。该蛋白含有156个氨基酸,理论分子质量为17.22kDa。从侧孢短芽胞杆菌A60中克隆到471bp的PeBL2基因,并将其构建到pET28a-TEV/LIC载体上进行原核表达。纯化的重组表达蛋白PeBL2能够引起烟草叶片的超敏反应和氧爆发,并且能够提高烟草的抗病性。用20μM的重组蛋白PeBL2处理六周龄的烟草叶片,同时利用BSA作为对照。接种灰葡萄孢菌菌块,3天后通过测量病斑直径来计算病斑抑制率。随机选取10个病斑测量直径,发现在处理和BSA之间有明显的差异。其中PeBL2处理的病斑直径平均为14.11mm,而对照组的病斑直径平均为22.5mm。与对照组相比,PeBL2处理明显抑制了灰葡萄孢菌的病斑扩展,说明PeBL2能诱导烟草叶片对灰葡萄孢菌的抗性。
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