【摘 要】
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目的:研究micro RNA-122及其靶基因CPEB1在角膜移植排斥中的作用。方法:1.建立小鼠穿透性角膜移植术(penetrating keratoplasty,PKP)模型;2.利用Real-time PCR分析mi R-122、
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目的:研究micro RNA-122及其靶基因CPEB1在角膜移植排斥中的作用。方法:1.建立小鼠穿透性角膜移植术(penetrating keratoplasty,PKP)模型;2.利用Real-time PCR分析mi R-122、CPEB1的表达;3.过表达agomir/antagomir-122分析CPEB1的表达及细胞凋亡;4.体外培养角膜基质细胞系,利用mi R-122结合位点野生型或突变型的CPEB1的慢病毒感染角膜基质细胞,后用促炎细胞因子(cytokine,TNFα/IL-1β/TNFγ)刺激并检测角膜基质细胞的凋亡和NO产生。结果:1.穿透性角膜移植术后流式检测:角膜移植术后未排斥组中免疫细胞较对照组的明显增加(P<0.05),而排斥组与对照组之间无明显差别(P>0.05)。2.Real-time PCR:mi R-122及CPEB1在角膜基质层中的表达最高,与角膜上皮层、内皮层差异有统计学意义(P<0.0001);而在免疫细胞(DC、BMM、T cell、B cell)中均未检测到mi R-122的表达,其靶基因CPEB1的表达量也较低。3.基质细胞感染:利用mi R-122结合位点野生型或突变型的CPEB1的慢病毒感染角膜基质细胞,48hr后感染率均达90%以上;4.过表达agomir/antagomir-122检测:转染agomir-122的基质细胞中,CPEB1的表达低于对照组,角膜基质细胞凋亡降低,差异有统计学意义(P<0.05),转染antagomir-122组中CPEB1的表达高于对照组,角膜基质细胞凋亡增加,差异有统计学意义(P<0.05);5.细胞凋亡及NO检测:过表达CPEB1促进角膜基质细胞凋亡和NO产生,差异有统计学意义(P<0.05);不论是CPEB1-WT或是CPEB1-Mutated基质细胞,应用细胞因子处理48hr凋亡明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);细胞因子处理组中,CPEB1-WT组中基质细胞较CPEB1-MT组中凋亡明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),而未处理组中,CPEB1-WT与CPEB1-MT无明显差异(P>0.05);不论有无细胞因子刺激,CPEB1-Mutated基质细胞组中,NO的产生均高于CPEB1-WT组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Micro RNA-122及其靶基因CPEB1在角膜基质细胞高表达,而micro RNA-122在免疫细胞中不表达;当micro RNA-122表达下调时(角膜移植排斥组),CPEB1表达呈上升趋势,导致角膜基质细胞凋亡及NO产生增加,从而促进角膜移植术后免疫排斥反应。
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