【摘 要】
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长白山白眉蝮蛇(Agkistrodonblomhoffiiussurensis)蛇毒Gln49磷脂酶A2同源物，经SDS-PAGE检测为一条带，分子量为16kDa左右。具有抗凝血活性、肌肉毒性，但缺乏磷脂酶A2活性。本文通过该蛋白质对不同细胞生长的影响以及细胞内蛋白表达的分析，表明其具有细胞毒性。MTT方法检测结果表明：Gln49-PLA2对MCF-7、Hela、ECV-304、K562和HL60
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长白山白眉蝮蛇(Agkistrodonblomhoffiiussurensis)蛇毒Gln49磷脂酶A2同源物，经SDS-PAGE检测为一条带，分子量为16kDa左右。具有抗凝血活性、肌肉毒性，但缺乏磷脂酶A2活性。本文通过该蛋白质对不同细胞生长的影响以及细胞内蛋白表达的分析，表明其具有细胞毒性。
MTT方法检测结果表明：Gln49-PLA2对MCF-7、Hela、ECV-304、K562和HL60五种细胞具有细胞毒性，且毒性作用存在时间和剂量依赖性；对K562和MCF-7细胞的半数有效剂量(IC50)分别为13μmol/L和1.2μmol/L。在给药浓度为半数有效剂量，作用8小时条件下，光学显微镜观察到K562细胞出现细胞碎片，MCF-7细胞脱离培养瓶壁面，表明Gln49-PLA2能够抑制两种细胞的生长，并具有毒性作用。
LDH方法检测结果表明：Gln49-PLA2引起K562和MCF-7细胞乳酸脱氢酶的释放，改变了细胞膜的通透性。流式细胞仪检测结果表明：该蛋白终浓度达28μmol/L，K562细胞凋亡比率为21﹪，终浓度达5μmol/L，MCF-7细胞凋亡比率为22.6﹪；随着蛋白用量增加，两种细胞线粒体膜电位均下降，进一步表明Gln49-PLA2诱导两种细胞发生凋亡；随着该蛋白浓度的增加，K562细胞内Bcl-2蛋白表达无明显变化，MCF-7细胞的Bcl-2蛋白的表达呈现下降趋势，提示Gln49-PLA2在诱导K562细胞凋亡过程中，Bcl-2的调控作用不占重要地位。Caspase蛋白试剂盒检测结果表明，随着Gln49-PLA2浓度的增加，MCF-7细胞中Caspase-3、Caspase-8表达量升高，结合Bcl-2蛋白的检测结果，推测该蛋白诱导MCF-7细胞发生凋亡是由线粒体途径和死亡受体途径共同参与实现的。
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