【摘 要】
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目的研究多叶重楼及其变种云南重楼主要有效成分差异,为多叶重楼长期作为云南白药系列产品的主要原料入药提供依据;对不同产地云南重楼品质进行评价及内生菌进行分离鉴定,初步探讨云南重楼品质与内生菌的相关性。方法采用HPLC测定不同产地多叶重楼和云南重楼根茎中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、H含量及重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ总含量,并建立其HPLC指纹图谱,比较差异;采用UPLC-ESI-Q-TOF-MS对不同产地
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目的研究多叶重楼及其变种云南重楼主要有效成分差异,为多叶重楼长期作为云南白药系列产品的主要原料入药提供依据;对不同产地云南重楼品质进行评价及内生菌进行分离鉴定,初步探讨云南重楼品质与内生菌的相关性。方法采用HPLC测定不同产地多叶重楼和云南重楼根茎中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、H含量及重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ总含量,并建立其HPLC指纹图谱,比较差异;采用UPLC-ESI-Q-TOF-MS对不同产地多叶重楼根茎中甾体皂苷主要有效成分进行定性分析;比较多叶重楼和云南重楼根茎中主成分差异;运用HPLC、微生物学培养手段及16S/18S r DNA测序技术对不同产地云南重楼品质进行评价及内生菌进行分离鉴定,并对云南重楼品质与内生菌的相关性进行初步研究。结果（1）不同产地多叶重楼和云南重楼根茎中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、H含量及重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ总含量差异较大,云南重楼根茎中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ总含量范围为2.2887%～8.4646%,显著超过了《中国药典》2020版0.60%的限量标准;多叶重楼根茎中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ总含量范围为0.1443%～1.8291%,南涧乐秋、洱源凤羽、大理海东、永平龙街、剑川马登、鹤庆西邑多叶重楼根茎中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ总含量达到了《中国药典》2020版0.60%的限量标准。云南重楼根茎HPLC指纹图谱共有13个共有峰,相似度大于0.922;多叶重楼根茎HPLC指纹图谱共有14个共有峰,除巍山金华、巍山龙街外的多叶重楼根茎相似度均大于0.900;多叶重楼和云南重楼根茎HPLC指纹图谱共有11个共有峰,两者的相似度较低,最高仅有0.225。（2）在正离子和负离子模式下鉴定出Parisyunnanoside A、Dichotomin、ParisaponinⅠ、Polyphyllin G、Pseudoproto-pb、Parisyunnanoside B、Parisyunnanoside C、Parisyunnanoside D、Parisyunnanoside E、PolyphyllinⅦ、Pennogenin-tetraglycoside、Polyphyllin H、PolyphyllinⅥ、Polyphyllin B、PolyphyllinⅡ、Reclinatoside、Gracillin、PolyphyllinⅠ、PolyphyllinⅤ、Prosapogenin A of Dioscin、Unknown(C44H72O16)共21个甾体皂苷类主要有效成分。按照在C18反向柱上出峰顺序依次为原偏诺皂苷类、原薯蓣皂苷类、伪原薯蓣皂苷类、偏诺皂苷类、薯蓣皂苷类五种骨架类型。不同产地多叶重楼和云南重楼主成分PCA分析结果显示,不同产地云南重楼根茎主成分聚为2类,不同产地主成分差异较大;不同产地多叶重楼根茎主成分聚为1类,多叶重楼与永平龙街、大理海东、大理凤仪、鹤庆西邑、南涧乐秋、巍山龙街、巍山巍宝山7个产地云南重楼根茎主成分距离较近,主成分相近。（3）分离鉴定出云南重楼植物内生菌347株,共细菌268株（41个属93个种）、放线菌20株（4个属11个种）,真菌59株（16个属30个种）;其中剑川羊岑的云南重楼根茎中Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ总含量（1.8656%）最高,其植物内生菌共有细菌39株（5个属17个种）、放线菌2株（1个属2个种）、真菌10株（4个属6个种）;大理凤仪云南重楼根茎中的重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ总含量（1.5234%）仅次于剑川羊岑,其植物内生菌共有细菌47株（6个属23个种）、放线菌1株（1个属1个种）、真菌21株（7个属12个种）。结论（1）不同产地多叶重楼和云南重楼根茎中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、H含量及重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ总含量差异较大,云南重楼根茎中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ含量及总含量高于多叶重楼;多叶重楼和云南重楼根茎HPLC指纹图谱相似度较低,化学成分差异较大。（2）从不同产地多叶重根茎中鉴定出原偏诺皂苷类、原薯蓣皂苷类、伪原薯蓣皂苷类、偏诺皂苷类、薯蓣皂苷类五种骨架类型21个甾体皂苷主要有效成分,不同产地云南重楼根茎主成分差异较大,不同产地多叶重楼根茎主成分差异较小。（3）从五个不同产地云南重楼中分离鉴定植物内生菌347株,共细菌268株（41个属93个种）、放线菌20株（4个属11个种）,真菌59株（16个属30个种）,植物内生菌多样性可能在不同产地云南重楼品质差异形成中发挥着重要作用。
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