OCT4腺病毒真核表达载体的构建及对心肌再生的作用

来源 :重庆医科大学 重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qiaofei888
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目的:构建八聚体结合转录因子4(OCT4)腺病毒真核表达载体pAV.Ex1d.-CMV>mOCT4/IRES/eGFP,探讨OCT4腺病毒载体对大鼠心肌再生的作用。方法:利用Gateway技术构建pAV.Ex1d.-CMV>mOCT4/IRES/eGFP载体,腺病毒包装后,用微量进样器直接注射到大鼠心肌,利用RT-PCR、免疫荧光分别检测心肌组织中OCT4的表达,HE染色检测OCT4表达后心肌组织是否正常。构建大鼠心梗模型,HE染色鉴定,在梗死区周围直接注射OCT4腺病毒载体,4周后Western检测心肌梗死区肌钙蛋白的表达。结果:免疫荧光法检测到外源性OCT4在心肌细胞核中表达呈红色荧光,RT-PCR在OCT4腺病毒组中可检测到OCT4的表达,而空病毒组与对照组则检测不到,HE染色结果表明OCT4在活体心肌表达后心肌组织形态正常,心肌梗死区周围注射OCT4腺病毒载体4周后肌钙蛋白在OCT4组的表达量与对照组、空病毒组比较有明显差异(P<0.05)。结论:外源OCT4可在活体心肌中表达,能促进梗死区心肌的再生。
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