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胚胎性别鉴定是胚胎工程技术的重要组成部分之一，对家畜育种、生产和遗传疾病的防治均有非常重要的意义。本论文为建立一种快速、可靠、易操作的牛胚胎性别鉴定方法做了以下探讨：1． 选用牛Y染色体特异序列设计引物建立PCR牛胚胎性别鉴定扩增体系。分别选择BOV97M做公牛特异扩增引物及1.715卫星DNA做牛特异扩增内标引物。在连续多重PCR里，前11个循环只用雄性特异引物扩增，之后再加入内标引物继续进行25个循环的扩增。BOV97M引物扩增产物为141bp，牛卫星1.715DNA扩增产物为216bp。用牛血样DNA优化连续多重PCR体系，该体系的准确率和灵敏度分别为100％（66/66）、10pg牛基因组DNA(约3个细胞)。由于在扩增过程中暂停循环添加内标引物，不仅费时费力，而且容易污染，故该扩增体系不适宜做为现场牛胚胎性别鉴定试剂盒。2． 选用牛牙釉蛋白（bAML）序列设计一对引物建立PCR牛胚胎性别鉴定扩增体系。该PCR体系对母牛DNA扩增只有一种产物（467bp），而对公牛DNA的扩增有两种大小不同的产物（467bp，341bp）。本实验从镁离子浓度、退火温度、酶浓度、引物浓度、变性剂、循环数及反应体积等方面对上述PCR系统进行了优化。优化体系为： 50mM KCl；10mM Tris-HCl；0.1% Triton X-100；2.0mM MgCl2；0.25mM/dNTP；3U Taq DNA 聚合酶；每条引物20pM。共50循环，前20个退火温度为53℃，后30个为54℃，反应体积50ul。其准确率和灵敏度分别为100％（60/60）和10pg DNA。本扩增体系优点在于选用一对引物，准确、灵敏、快速，适宜做牛胚胎性别鉴定试剂盒。3． 对日本产品LAMP(Loop-mediated isothermal amplification)法牛胚胎性别鉴定试剂盒进行了评价研究。运用该试剂盒在实验室及现场鉴定胚胎性别，准确率为100％（30/30），灵敏度为1pg，现场移植符合率为3/3，具有快速、准确、灵敏、易检测等优点。不足之处是在高浓度模板（>500ng）时出现假阳性（雌性鉴定成雄性）；非特异扩增无法排除。上述实验结果表明，LAMP试剂盒比PCR试剂盒更适用于现场牛胚胎性别鉴定。4． 对开发LAMP法牛胚胎性别鉴定试剂盒进行了探索性研究。设计两组8条LAMP牛胚胎性别鉴定引物，建立了LAMP法牛胚胎性别鉴定扩增体系。实验中发现，在无甜菜碱时，LAMP反应仍获得少量扩增产物；DMSO对LAMP有抑制作用。同时对引物设计及体系优化进行了研究。