【摘 要】
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用PCR技术从具有[URE3]表型的酵母菌3687的基因组DNA中扩增到Ure2p朊病毒结构域(PrD)基因,克隆到pGEM-T载体中,序列测定结果表明克隆到正确的PrD基因.用硫酸铵分级沉淀、疏水
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用PCR技术从具有[URE3]表型的酵母菌3687的基因组DNA中扩增到Ure2p朊病毒结构域(PrD)基因,克隆到pGEM-T载体中,序列测定结果表明克隆到正确的PrD基因.用硫酸铵分级沉淀、疏水层析、阴离子交换层析和反相层析纯化PrD蛋白,用Tricine/SDS-PAGE和质谱分析鉴定纯度和分子量.结果表明Ure2p的朊病毒结构域(PrD)在体外具有朊病毒蛋白的特点,也表明PrD在[URE3]表型形成中的重要作用.将PrD基因与谷胱苷肽-S-转移酶(GST)基因重组,在大肠杆菌中表达了可溶性的GST-PrD融合蛋白(sGST-PrD).从中国小尾寒羊血液分离的白细胞中提取基因组DNA,用PCR反应扩增出羊的正常朊蛋白(OvPrP)基因,将其克隆到质粒pUC19中.用大肠杆菌表达的牛朊病毒正常成熟蛋白(BoPrP)免疫新西兰白兔,获得了与朊病毒蛋白(PrP)反应的抗体Tl.根据致病型朊病毒(PrP)能抵抗蛋白酶消化的特性,用蛋白酶K消化脑组织朊病毒263K的金黄地鼠的脑组织提取物内检测到抗蛋白酶K消化的致病型PrP.结果表明可以用自制的抗血清检疫牛海绵状脑病和羊瘙痒病,防止其传入中国.
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