免疫组织化学技术已逐渐发展为广泛应用于细胞或组织中蛋白的鉴定、定位以及定量分析的重要技术之一。目前已知的免疫组化研究方法有很多，每种方法又具有自己独到的特点、适用性及一定的局限性。因此，分析比较各种方法的优缺点，认清其在不同研究水平下的适用范围，在免疫组化方法选择上将具有重大意义。 本研究以模式生物海胆为试验材料，利用低温冷冻半薄切片技术，研究比较了免疫金银染色和免疫荧光两种方法，试验归纳了它们各自的特点及适用性；并利用这两种技术方法对海胆卵细胞受精过程中关键酶蛋白——葡萄糖-6-磷酸脱氢酶进行了定位及定量研究；此外，利用in vivo图像分析技术和“灰度-吸光度”技术，以葡萄糖-6-磷酸脱氢酶为目标蛋白，探讨了实时测定活体卵细胞受精过程中酶蛋白活性变化的可行性，并分析了葡萄糖-6-磷酸脱氢酶在受精过程中的活性变化。 (1)利用基于低温冷冻半薄切片的免疫金银染色技术，标记具有较高持久性，此方法尤其适用于酶蛋白的定量分析以及在与其他组织化学手段相结合的条件下进行的活性研究；而免疫荧光技术，清晰的活性标记可以很容易的被观测到，是研究酶蛋白定位的合适手段。 (2)基于这两种技术的比较分析，随后试验采用免疫荧光技术对海胆卵细胞受精过程中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶进行了定位分析。研究发现，在未受精的卵细胞中，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶主要堆积于皮层颗粒内或附着于内质网膜上。经过受精刺激之后，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶被从内质网和皮层颗粒中释放出来。同时，采用免疫金银染色方法定量分析了海胆卵细胞受精过程中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶酶蛋白量的变化。测量结果显示为逐渐下降趋势，单因素方差和同类子集分析表明，未受精卵细胞内G6PDH含量和受精后卵细胞内G6PDH含量存在显著差异(p<0.05)。 (3)利用in vivo图像分析技术对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶在受精过程中的活性进行了研究。试验在方法上通过生物化学、物理光学、影像学的有机结合，实现了在不破坏细胞的前提下，对存活海胆卵细胞的受精过程中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的活性进行了实时监测和定量分析。试验结果显示：在受精之前，卵细胞中的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基本不具有活性，经过受精刺激后，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的活性被激活，其活性在随后的受精卵发育过程中依然呈现上升趋势；活性区域分析表明，相比较于细胞质区域，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶在皮质区内的活性相对较高。 通过对实验结果的分析可以得出结论，免疫荧光技术和免疫金银染色技术都是敏感的、特异的、可靠的标记技术，都可以在免疫组化研究中被广泛应用；invivo图像分析和“灰度-吸光度”转换方法作为新兴的实时定量分析技术，具有广阔的应用范围和一定的发展前景。同时可知，海胆卵细胞的受精过程，可以激活细胞内的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，使它从不溶性的、无活性状态转变为可溶的。活性状态，且其活性会在随后的时间内继续加强。