【摘 要】
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本实验室从土壤中分离出了一株能产灰藤黄菌素(griseolutein)的链霉菌——灰藤黄链霉菌(Streptomyces griseoluteus)。灰藤黄菌素是具有吩嗪核心结构的一种抗生素,具有很强的
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本实验室从土壤中分离出了一株能产灰藤黄菌素(griseolutein)的链霉菌——灰藤黄链霉菌(Streptomyces griseoluteus)。灰藤黄菌素是具有吩嗪核心结构的一种抗生素,具有很强的抗菌活性,对革兰氏阳性菌和阴性菌的抑制效果比吩嗪其它衍生物如绿脓菌素( pyocyanine )、绿针菌素( chlororaphin )和吩嗪-1-羧酸(phenazine-1-carboxylic acid)都要好。有研究证实,其较强的抗菌活性主要归因于吩嗪核心结构上C-6的取代基羟基乙酰甲基或1,2-二羟基乙氧基甲基。但是到目前为止还没有关于灰藤黄菌素生物合成基因的报道。为证实灰藤黄链霉菌中存在吩嗪核心结构的合成基因及后续转化基因,本研究构建了灰藤黄链霉菌的Fosmid基因组文库,为后续的实验奠定了基础。通过比对吩嗪核心结构的保守序列,设计了特异性引物,采用多轮PCR的方法筛选文库,最终筛选到7个阳性克隆。通过酶谱分析的方法,确定了最有可能包含完整吩嗪合成基因簇的克隆10D11,采用鸟枪法进行测序,并用PCR的方法补全缺口。最终,测得32973bp的碱基序列。采用ORF和同源性分析的方法,共得到27个ORF,其中6个为吩嗪生物合成的基因sghBCDEFG。ORF21-25为后续转化基因,最终的产物为灰藤黄菌素。
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