RSOD基因的合成及其苹果的遗传转化研究

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植物分子育种可以通过提高植物的抗病、虫、杂草能力及非生物胁迫抗性来提高植物的产量。近年来,利用植物作为生物反应器生产蛋白质在工业和临床应用上越来越受到重视。通过这种方式已经生产了多种重组酶类和抗体。仅从经济角度来考虑,植物生物反应器与发酵相比较而言生产成本要低的多。植物生长发育仅需要太阳能、CO2和一些无机肥料,而发酵却需要昂贵的仪器设备、电能和培养基。目前,植物生物反应器已经从理论研究转向商业探索,并且其表达水平已经达到了和细菌、酵母及动物细胞培养相提并论的程度。 人的SOD作为一种重要的医药和化妆品原料,有着重要的商业价值。本论文通过对人Cu/Zn-SOD基因的改造(改造后命名为RSOD),旨在提高该基因在转基因植物中的表达量和稳定性。该基因的改造包括:使用植物偏爱密码子,在其3`端引入一段内质网滞留序列(KDEL),在5`端引入烟草分泌信号肽序列(PR-S)。本研究通过PTDS基因合成技术完成了人Cu/Zn-SOD基因的拼接,产物克隆及全长基因的核苷酸全序列测定。然后构建了两个分别由CaMV35S启动子和番茄果实特异性PG基因启动子控制RSOD基因表达的植物双元载体。最后通过农杆菌介导法,用CaMV35S启动子控制RSOD基因表达的植物双元载体转化拟南芥,用番茄果实特异性PG基因果实特异性启动子控制RSOD基因表达的植物双元载体转化苹果。 利用农杆菌蘸花法共获得了21株拟南芥阳性植株,GUS染色和PCR鉴定结果初步表明,外源基因已经整合入转基因拟南芥基因组中。RT-PCR分析结果显示,RSOD基因在转基因植株中发生了转录。部分T1代植株在含卡那霉素的培养基上发生了3:1分离,符合孟德尔遗传定律。通过盐处理,转基因植株的抗盐性明显高于非转基因植株。 通过农杆菌介导法共获得了4株苹果阳性植株,GUS染色和PCR鉴定结果初步表明,外源基因已经整合进了转基因苹果基因组中。相关研究仍在进行当中。
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