绿原酸对视网膜色素上皮细胞氧化损伤保护作用的实验研究

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目的:研究绿原酸(chlorogenic acid,CGA)对过氧化氢(Hydrogen peroxide)处理的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)细胞抗氧化损伤的保护作用,为将来临床上利用绿原酸治疗老年黄斑变性提供实验依据。方法:过氧化氢(H2O2)以浓度和时间梯度作用于ARPE-19,通过MTT法检测细胞活性,建立ARPE-19细胞氧化损伤模型。采用MTT法检测CGA对ARPE-19细胞的增殖及毒性作用。实验分3组:正常对照组,H2O2模型组,CGA+H2O2干预组。应用紫外分光光度计法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量的变化;Hoechst33258染色及流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:1.H2O2以浓度和时间梯度诱导ARPE-19细胞凋亡,建立氧化损伤模型适宜条件为500μmol/L的H2O2作用HRPE细胞24h。2.绿原酸各浓度组ARPE-19细胞活性与空白对照组比较,差异无统计学意义;绿原酸各浓度干预组细胞活性较H2O2模型组高,在CGA浓度为100μmol/L,活性最高,选此浓度进行后续实验。3.与正常对照组相比,H2O2模型组SOD活性、GSH含量下降, MDA含量增加,差异具有统计学意义(P<0.05);与H2O2模型组相比,CGA干预组的SOD活性及GSH含量均升高,MDA含量下降,差异有统计学意义(P<0.05)。4.与正常对照组比较,H2O2模型组的凋亡率显著增加,差异具有统计学意义;与H2O2模型组比较,CGA干预组的凋亡率下降,差异有统计学意义。结论:H2O2可以对ARPE-19细胞产生氧化损伤,引起细胞凋亡,CGA对ARPE-19细胞无促增殖及毒性作用并对ARPE-19细胞的氧化损伤有保护作用,可以降低H2O2诱导的ARPE-19细胞凋亡率;
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