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Fab抗体片段作为小分子抗体的一种,在临床应用中有着全长抗体无法比拟的优势。大肠杆菌是Fab片段最主要的表达系统,然而由于外源基因表达时通常会在大肠杆菌内形成不可溶的包涵体而不具有生物活性,所以重组Fab在大肠杆菌中的可溶性表达一直受到人们的关注。本研究以抗VEGF抗体Fab片段为例,研究了重组Fab在大肠杆菌中进行可溶性表达及纯化的策略,并对分离纯化后的产物进行分析,从而为其他种类的重组Fab分子的可溶性表达提供经验和借鉴,并为其大规模的工业生产奠定了实验室研究的基础。抗VEGF抗体Fab片段能够抑制VEGF的促血管生成作用,在糖尿病性黄斑水肿等眼科疾病的治疗有重要的应用价值。本课题将带有抗VEGF抗体Fab片段基因的表达载体在大肠杆菌的周质空间中分泌表达,随后分离纯化得到高纯度的产物。实验证明,使用phoA表达系统、与分子伴侣共表达、向培养基中添加促溶剂以及降低诱导表达的温度等措施可以提高抗VEGF抗体Fab片段在大肠杆菌中的可溶性表达,使用Capto L一步亲和层析纯化表达产物,能够获得纯度>99%的目的蛋白。应用SEC-HPLC、MALDI-TOF MS、BIAcore SRP检测及血管内皮细胞活性检测等方法分析所获纯化产物的质量,结果表明其纯度达到99.34%,相对分子质量为48.35kDa,与理论值相近,对VEGF的亲和力为10.2pmol/L,高于商品化兰尼单抗,以及EC50为24.07mg/mL,达到标准品的94.35%,证明具有较好的生物学活性。