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目的： 在本研究中拟利用Realtime-PCR、细胞转染及miRNA功能解析方法，检测miR-34a及miR-135a在不同增殖能力的胰腺癌细胞中的表达，探讨miR-34a及miR-135a参与胰腺癌细胞增殖调控的分子机制，以及在胰腺癌细胞增殖调控中miR-34a及miR-135a与MAPK信号转导通路的相互关系。并用这些方法验证UCA1的作用靶点，并利用在体实验证明UCA1与miR-34a及miR-135a的靶向调控关系。 方法: 采用非解离型胰腺癌细胞Capan-2及PC-1细胞和解离型胰腺癌细胞Aspc-1及PC-1.0细胞。PC-1细胞系是利用BOP诱导的叙利亚仓鼠实验性胰腺癌模型进行肿瘤原代培养后建立的。后将PC-1细胞经尾静脉注射于仓鼠，取转移肿瘤再次进行原代培养而建立了PC-1.0细胞系。PC-1细胞培增时间为24h，PC-1.0倍增时间为12h。Aspc-1细胞在增殖能力方面类似PC-1.0细胞，倍增时间12h，而Capan-2细胞类似PC-1细胞，倍增时间24h。此外，还选用了在前期研究中建立的PC-1.0MEK1基因敲减胰腺癌细胞。 本实验中应用miR-34a及miR-135a抑制剂和激动剂均由Life techonology公司设计合成，miR-34a探针及U6由Life techonology公司设计合成，载体RNAiMAX购自Life techonology公司。miRNA提取试剂盒购自Life techonology公司。 通过Real-time PCR验证miR-34a及miR-135a在具有不同增殖能力的胰腺癌细胞中的表达。解离型胰腺癌细胞转染miR-34a及miR-135a抑制剂，非解离型胰腺癌细胞转染miR-34a及miR-135a激动剂，并通过细胞增殖、凋亡、细胞体外侵袭实验和细胞形态学变化等实验，分别研究不同增殖能力的胰腺癌细胞的功能学变化。通过qRT-PCR及荧光酶素试验验证UCA1与miR-34a及miR-135a靶向关系，并通过在体实验证明UCA1及miR-135a的靶向调控关系。 结果: 为验证前期研究miRNA microarray的实验结果，本实验利用Real-time PCR进一步验证在解离型胰腺癌细胞（PC-1.0和Aspc-1）以及非解离型胰腺癌细胞（PC-1和Capan-2）中的miR-34a及miR-135a的表达。结果证实miR-34a及miR-135a在PC-1.0和PC-1细胞中的表达与前期miRNA microarray的结果一致，PC-1.0细胞中miR-34a及miR-135a的表达较PC-1细胞上调（P＜0.05）。在与上述细胞增殖特性相似的人胰腺癌细胞Aspc-1和Capan-2中，miR-34a及miR-135a表达同样为Aspc-1中较Capan-2中表达上调（P＜0.05）。转染miR-34a抑制剂24h后，PC-1.0细胞中miR-34a表达抑制率为98.6％（P＜0.05），Aspc-1细胞中抑制率为89.3％（P＜0.05）;转染miR-34a激动剂24h后，PC-1细胞中表达增强101％（P＜0.05），Capan-2细胞中表达增强353％（P＜0.05）。转染miR-135a抑制剂24h后，PC-1.0细胞中miR-135a表达抑制率为98.8％（P＜0.05），Aspc-1细胞中抑制率为88.7％（P＜0.05）;转染miR-135a激动剂24h后，PC-1细胞中表达增强103％（P＜0.05），Capan-2细胞中表达增强362％（P＜0.05)。转染miR-34a及miR-135a抑制剂后明显抑制了解离型胰腺癌增殖能力，在凋亡和细胞形态学方面作用不显著。转染miR-34a及miR-135a激动剂后非解离型胰腺癌细胞的增殖能力明显增强，PC-1细胞的体外侵袭能力被抑制，胰腺癌细胞的凋亡和细胞形态学方面无明显变化。利用前期研究中建立的PC-1.0MEK1、MEK2基因敲减胰腺癌细胞，通过Realtime-PCR检测miR-34a及miR-135a的表达变化。结果显示PC-1.0MEK1、MEK2基因敲减胰腺癌细胞中miR-34a及miR-135a的表达较对照细胞明显下调（P＜0.05）。结果表明，miR-135a是UCA1的直接靶点，miR-34a与UCA1无明显相关性。在体实验进一步检测miR135a在UCA1scramble组表达上调，在UCA1siRNA组表达下调，进一步验证了UCA1及miR-135a之间的靶向调控关系。 结论: 1、miR-34a及miR-135a在解离型胰腺癌细胞PC-1.0和Capan-2中高表达，在非解离型胰腺癌细胞PC-1和Aspc-1中低表达，二者存在明显差异。2、miR-34a及miR-135a可能通过MEK1介导的正反馈分子回路参与调控胰腺癌细胞的增殖。3、miR-135a是UCA1的直接靶点，而miR-34a与UCA1无明显相关性。同时，UCA1通过靶向作用于miR-135a调控胰腺癌细胞的增值及转移。