目的：　　1、建立单个大鼠触须毛囊上段裸鼠皮下移植方法，利用大鼠触须毛囊培养液作为促进毛乳头（dermal papilla，DP）再生的诱导来源，建立DP体内再生诱导模型；　　2、追踪DP再生的完整过程，观察毛囊培养液对DP再生率的影响；　　3、追踪模型中新生DP的细胞来源；　　4、选取与毛囊真皮成分发生密切相关的Wnt5a信号分子：①追踪wnt5a在DP再生过程中的时空表达；②观察wnt5a在大鼠DP胚胎发生前后的表达模式；②对比DP体内诱导模型与大鼠DP胚胎发生过程Wnt5a的表达模式，初步探讨DP再生机制。　　方法：　　1、DP体内再生诱导模型制作　　①大鼠触须毛囊上段移植体的制作和鉴定：用显微器械肉眼分离得到SD大鼠触须毛囊，以镊子轻轻夹住毛囊上端并挤压，暴露毛囊下端红色的含毛乳头的毛球部，镜下紧贴毛球部上方用新剃须刀片将其横向裁切，得到大鼠触须毛囊上段标本。随机抽取大鼠触须毛囊上段标本和切除的毛球部，扫描电镜观察是否完整切除毛球部。　　②毛囊培养液的应用：取大鼠触须毛囊上段标本时，挑选出移植用的生长期毛囊，其余毛囊（100-140个），加入含10％血清DMEM培养基培养，隔天换液。第2、4、6、8天换液时留取旧液用灭酶的小管保存，1h内裸鼠注射，注射于裸鼠毛囊移植点皮下，0.1ml/移植点。　　③单个大鼠触须毛囊上段裸鼠皮下移植：　　实验组：毛囊上段移植体用毛囊移植笔以30-45度角注射于裸鼠皮下，每个毛囊距离1-1.5cm，背部左右两侧各三个。移植后第2，4，6，8天分别注射毛囊培养液；　　对照组：移植方法同实验组，但移植后第2，4，6，8天分别注射含10%血清的DMEM培养液。移植后定期拍照、取材、制作石蜡切片，观察形态学变化。　　2、新生DPC来源追踪　　①分组：毛囊上段BrdU浸泡标记组：大鼠触须毛囊用含5μmol/L BrdU的10%血清DMEM培养基浸泡4小时后再切除毛球部，裸鼠皮下移植；　　大鼠BrdU标记组：每隔2小时对大鼠腹腔注射5mg/kg的BrdU，连续注射4次后处死大鼠，取触须毛囊，切除毛球部后进行裸鼠皮下移植；　　BrdU裸鼠注射标记组：正常大鼠毛囊切除毛乳头后进行裸鼠皮下移植，取材前2h裸鼠腹腔注射5mg/kg的BrdU，2h后处死取材。　　②定期取材，制作石蜡标本并切片，荧光免疫组化追踪BrdU的表达情况。　　3、Wnt5a在大鼠毛囊胚胎发生和大鼠触须毛囊上段裸鼠移植诱导DP再生模型中表达的对比　　①荧光免疫组化法观察wnt5a在大鼠触须毛囊上段裸鼠移植诱导DP再生过程的时空表达情况。　　②大鼠DP胚胎发生过程Wnt5a的表达模式：分别取E12.5、E13.5、E14.5、E15.5胎龄的大鼠胚胎，固定、制作蜡块、切片，HE染色观察表皮和真皮形态变化，免疫组化观察wnt5a表达情况及时间变化趋势。　　③对比 DP体内诱导模型与大鼠 DP胚胎发生过程 Wnt5a的表达模式，初步探讨DP再生机制。　　结果：　　1、DP再生模型制作　　①大鼠触须毛囊上段切除效果鉴定：电镜扫描结果显示，毛囊切面光滑，切除方法效果良好，外层有结缔组织鞘包裹整个毛囊结构，内部可见外根鞘包裹毛根，未见毛乳头。由于毛乳头部位无毛根，因此可以确定毛乳头已被完全切除。　　② DP再生诱导模型形成过程观察：移植术后的裸鼠背部可见移植点距离均一，伤口微小，流血少，伤口恢复迅速。至第3天移植部位周围皮肤长出细密毛发。第22天在其中一个移植点观察到一根触须样的毛发纤维。大鼠处死后观察：移植的毛囊上段没有移位。移植的毛囊上段已向下生长形成完整的毛球部，毛球部形态与触须毛囊相似。毛囊周围血供丰富，毛囊上段可见一条类似毛球部血供的红色线状结构，轻轻挤压此结构，可见毛囊下端突出于红色的含新生毛乳头的毛球部。　　HE染色观察：对照组和实验组大鼠在毛囊断端都有新生的结缔组织包裹形成鞘状，但对照组大鼠毛囊形成的结缔组织鞘形状不规则，在毛囊断端形成明显凹陷，新生成的结缔组织鞘内有血供形成，但细胞数稀少，没有形成毛乳头。实验组大鼠触须毛囊上段移植后第3天,毛囊断端已被结缔组织包裹,结缔组织鞘已经完整，中部断端处稍向内凹陷，但切断痕迹并不明显，内部有细胞填充，但数量较少。移植后第7天,结缔组织鞘增厚，毛乳头外周开始形成，内有血管，毛乳头外周也有大量细胞聚集，血供丰富。移植后第9天,结缔组织鞘明显增厚，内部细胞生长速度相对较慢，典型的梨形毛乳头已经形成，毛囊断端移植部位周围有小毛囊正在形成。移植后第3周,大鼠毛囊整体被结缔组织鞘包裹，一侧可以看到明显断端，此处结缔组织鞘向外膨出，另一侧则不明显。典型、成熟DP已形成，移植体周围出现大量脂肪组织，与对照组相比，这些脂肪组织更像是新生成而不是裸鼠本身固有组织。所取实验组标本除少数毛囊移植体失活外，其余成活毛囊全部重新长成不同生长程度的毛乳头，DP再生率为88%。　　2、新生DPC来源观察　　实验组采取了三种不同的BrdU导入方式，通过荧光免疫组化证实，毛囊上段BrdU浸泡标记组的导入效果良好。　　DP形成部位和毛囊断端位置结缔组织鞘的细胞BrdU呈强阳性表达，毛囊上段顶端细胞呈弥散性阳性表达，提示再生的DP很可能来源于毛囊移植体的结缔组织鞘。裸鼠皮肤无阳性细胞表达。　　3、Wnt5a在大鼠毛囊胚胎发生和大鼠触须毛囊上段裸鼠移植诱导 DP再生模型中的表达模式：　　①实验组大鼠触须毛囊上段移植后第3天，在毛囊上段顶端和毛囊断端的结缔组织鞘Wnt5a呈高表达。移植后第7天，顶端细胞逐渐向下分化形成DP细胞，呈强阳性，毛球部外周 Wnt5a呈阳性表达，毛囊断端的结缔组织鞘 Wnt5a呈高表达。移植后第9天，典型的梨形DP已形成，其中Wnt5a呈强阳性。　　② E12.5 Wnt5a在表皮细胞表达；E13.5 Wnt5a在表皮细胞表达，且表达增强；E14.5 Wnt5a表达由表皮转移至真皮，在真皮细胞浆明显表达；E15.5 Wnt5a表达在真皮结缔组织明显增强，在表皮的表达消失。　　结论：　　①本研究建立的单个大鼠触须毛囊上段裸鼠移植诱导DP再生的模型，DP体内再生率最高、稳定、可重复性高，可以作为研究DP体内再生的良好平台；　　②毛囊移植笔的应用使毛囊上段移植部位创伤小，愈合迅速；其次移植的毛囊方向、角度、深度具有高度可控性；并可实现单个毛囊的移植；　　③毛囊培养液短期、小量应用即可高效促进毛球部DP的再生；　　④再生的DPC可能来自毛囊移植体的结缔组织鞘；　　⑤ Wnt5a在DP胚胎发生前后及本模型DP形成的部位呈现高表达，说明Wnt信号通路与DP的再生有密切的关系，其中Wnt5a可能扮演了非常主要的角色。