目的：建立以RNAi方法抑制钙调神经磷酸酶表达的技术平台，在大鼠心肌细胞和血管内皮平滑肌细胞中检验抑制效果，为后续以RNAi的策略治疗多种心脏疾病和心脑血管疾病奠定基础。 方法：以U6 RNA表达盒--细胞内退火的策略构建针对大鼠钙调神经磷酸酶mRNA第1053位～1071位核苷酸的siRNA；采用差速贴壁法体外原代培养大鼠心肌细胞；NPY刺激培养的心肌细胞，转染针对钙调神经磷酸酶的siRNA，Western blot方法测定心肌细胞内钙调神经磷酸酶表达水平，定磷法测定心肌细胞内钙调神经磷酸酶的催化活性，<3>H-leu掺入量测定法观察心肌细胞蛋白质合成速率的变化；采用组织贴块法体外原代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞；梯度浓度的NPY刺激原代培养的大鼠血管平滑肌细，定磷法测定血管平滑肌细胞内钙调神经磷酸酶的催化活性，MTT法测定血管平滑肌细胞增殖速率的变化；特定浓度的NPY刺激血管平滑肌细胞，转染针对钙调神经磷酸酶的siRNA，Western blot方法测定血管平滑肌细胞内钙调神经磷酸酶表达水平，MTT法测定血管平滑肌细胞增殖速率的变化，免疫组织化学染色测定血管平滑肌细胞中原癌基因c-fos表达水平的变化。 结果：完成大鼠心肌细胞和血管平滑肌细胞体外原代培养；成功构建针对大鼠钙调神经磷酸酶mRNA第1053位～1071位核苷酸的siRNA；针对CaN的siRNA在原代培养的心肌细胞和血管平滑肌细胞中均可以有效地抑制NPY刺激引起的CaN表达上调；针对CaN的siRNA片段在原代培养的心肌细胞中可以有效地抑制NPY刺激引起的CaN酶活性的上调，拮抗NPY对心肌细胞蛋白质合成速率的上调作用；浓度为10<-6>mol/L的NPY适合作为刺激因素诱导血管平滑肌细胞中CaN活化；针对CaN的siRNA可以有效地抑制NPY引发的血管平滑肌细胞增殖，下调血管平滑肌细胞中原癌基因c-fos的表达。 结论：以U6 RNA表达盒——细胞内退火的策略构建的针对CaN β mRNA第1053位～1071位核苷酸的siRNA在原代培养的大鼠心肌细胞和血管平滑肌细胞中均可以有效地封闭CaN的表达，抑制NPY刺激导致的心肌细胞肥大和血管平滑肌细胞增殖。