Bacillus amyloliquefaciens SY07产α-葡萄糖苷酶抑制剂条件优化及成分分析

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糖尿病是一种以高血糖为特征并伴随多种并发症的代谢性疾病,已成为继心脑血管疾病和癌症之后严重威害人类健康的第三大疾病。寻求高效的降血糖功能因子逐渐成为社会研究的热点。α-葡萄糖苷酶抑制剂通过抑制低聚糖的水解,降低餐后人体对葡萄糖的吸收,从而达到有效治疗非胰岛素依赖型糖尿病的目的。本论文主要从高产α-葡萄糖苷酶抑制剂菌种的筛选和鉴定、发酵产物中α-葡萄糖苷酶抑制活性成分的理化特性分析及分离纯化方面进行研究,主要结论如下:微生物数量大,种类多,生长快,易培养,且酶系复杂,几乎可以分解一切天然物质。与纳豆菌、米曲霉、黑曲霉和红曲霉菌株相比,细菌菌株SY07发酵大豆对α-葡萄糖苷酶表现出强抑制作用,通过形态学特征、生理生化特征以及16SrRNA和gyrB基因序列测定,鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌SY07(Bacillus amyloliquefaciens SY07)。确定B. amyloliquefaciens SY07产α-葡萄糖昔酶抑制剂的最佳发酵条件为:豆渣质量浓度5%,接种量2%,250 mL锥形瓶装液60 mL,培养基初始pH值6.5,摇床转速180 r/min,37℃下发酵48 h。此优化条件下,发酵液对α-葡萄糖苷酶抑制活性达到60.08%,比优化前培养基的47.07%提高了 13.01%。酶抑制动力学分析结果显示发酵粗提物中的主要成分对α-葡萄糖苷酶表现为可逆的反竞争性抑制,活性组分具有较强的酸碱耐受性和耐热性,并且极性较高,初步分析活性代谢产物的成份可能含有糖类等物质。利用透析和葡聚糖凝胶层析手段对发酵样品中α-葡萄糖苷酶抑制剂进行分离纯化,得到一高活性组分,其IC50值为0.056mg/mL,与阿卡波糖的IC50值接近,后续对活性单体的研究具有重要的科学价值。
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