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肿瘤坏死因子α(TNFα)是一种特异性杀伤肿瘤细胞的多功能细胞因子,由于其严重的毒副作用限制了它的临床应用.为了获得具有更高抗肿瘤活性和低毒或无毒的突变体,我们在分析了TNFα分子发行的途径及突变体研究成果的基础上,应用PCR技术,以重组人TNFα为模板,扩增出TNF60的编码序列,经DNA序列测定证实后克隆入pBV220载体,获得了表达N端缺失59个氨基酸的突变体(TNF60)工程菌.工程菌经发酵、离心收菌、菌体超声破碎、抽提包涵体、8mol/L盐酸胍变性、Sephacryl S-200凝胶过滤纯化、复性、Superdex75进一步纯化等一系列处理后,获得分子量为10500Da的重组蛋白,SDS-PAGE表明,TNF60纯度〉95%.纯化的重组蛋白TNF60分别在L929、Hep-2、U937细胞上检测细胞毒性及研究了与TNFα联合应用的生物学效应,发现TNF60无直接的细胞毒性,但却表现出不同程度的增强TNFα细胞毒性的作用.TNFN60增强TNFα细胞毒性作用可能与其结合了TNFα的可溶性受体,部分消除了TNFα可溶性受体对TNFα的拮抗作用或封闭了TNFR75有关.对TNF60的进一步研究将有助于深入了解TNFα的作用机制,为TNFα的蛋白质工程研究提供新的方法和途径;TNF60与TNFα联合用药可以降低TNFα的临床应用剂量,提高其抗肿瘤作用,降低其毒副作用,从而扩大TNFα的临床应用范围,提高其治疗价值.