苹果黑星病是世界各苹果产区的重要病害之一,主要为害叶片和果实,造成叶片早期脱落,树势降低,受害果实开裂畸形,失去商品价值。对苹果黑星病病菌进行研究,有助于了解病菌的传播及病害发生,发展和流行的规律。本文应用SSR分子标记技术对苹果黑星病病菌的遗传多样性进行了研究,取得了以下结果:1.对21对苹果黑星病菌特异性引物进行了检测。结果表明,有3对引物对供试苹果黑星病菌株标记不出多态性位点;有18对引物可以标记出,其中6对引物标记的多态性位点较为丰富,证明这18对引物可以应用于苹果黑星病菌SSR标记的相关实验研究。2.建立了18对引物应用于苹果黑星病菌SSR标记的反应体系。确定的最适反应体系为:10μL体系中,10×Buffer 1μL,MgCl2(25 mmol/L)0.7μL,dNTPs(10 mmol/L)0.16μL,引物(1μmol/L)4μL,Taq DNA聚合酶(1U)0.1μL,DNA模板(1 mg/L) 1μL, ddH2O 3.04μL。PCR扩增程序为94℃5 min 1个循环;94℃40s, Ta℃40s, 72℃40 s 30个循环;72℃,10 min。经多次扩增实验证明,该反应体系具有重复性和稳定性。3.采用SSR分子标记技术分析了来源于中国陕西、英国和印度共110个苹果黑星病菌株的遗传多样性。结果表明,陕西菌株与英国菌株亲缘关系较近,与印度菌株亲缘关系稍远;印度菌株内互相之间亲缘关系非常近;个别菌株有较大程度的变异,有较大程度的遗传多样性;菌株间的遗传差异与地域无明显的相关性,与不同的苹果品种之间也无明显的相关性。初步推测中国陕西,英国,印度的苹果黑星病病菌都是起源于欧洲。该研究结果对认识苹果黑星病菌的遗传多样性具有重要理论意义,对合理开展针对苹果黑星病防治、抗源选择、病菌传播路线和毒性变异规律的研究提供了理论依据。