【摘 要】
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博士后工作主要集中在两个方面:分离沙冬青抗冻基因和马铃薯抗青枯病相关基因.沙冬青是中国特有的温带沙漠常绿豆科植物,作者在攻读博士学位期间已从沙冬青叶片中分离得到一
【出 处】
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中国农业科学研究院 中国农业科学院
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博士后工作主要集中在两个方面:分离沙冬青抗冻基因和马铃薯抗青枯病相关基因.沙冬青是中国特有的温带沙漠常绿豆科植物,作者在攻读博士学位期间已从沙冬青叶片中分离得到一高活性的抗冻蛋白afp(20mg/mL,热滞活性为0.9℃).该实验即根据该抗冻蛋白N端20个氨基酸序列设计5特异引物,用Oligo(dT)<,16>作为3引物,以经冷诱导处理的沙冬青叶片总RNA为扩增模板,采用RT-PCR技术扩增得到了一段冷诱导相关的cDNA序列,命名为am1.序列分析表明am1和烟草叶绿体F<,0>-ATPase亚基和Ⅰ和Ⅲ基因有68%的同源性.以am1为探针与沙冬青基因组DNA进行Southern杂交,确证该cDNA片段来源于沙冬青基因组,但还不能确定am1是否为多拷贝基因.Northern杂交结果表明,am1基因冷诱导1小时就开始转录,在冷诱导处理的5天内其转录基本保持稳定.此外,构建了沙冬青冷诱导叶片的cDNA文库,以筛选全长cDNA序列作进一步的结构及功能分析.利用R基因的保守性,根据NBS区设计PCR引物,利用这些引物,以不同马铃薯品种(包括抗青枯病898006,感青枯病品种中薯3号、Trident、晋春1号、春薯3号、Wischip等)的基因组DNA为模板进行PCR扩增,以期找到抗青枯病品种与感病品种间可能存在的某些差异,但目前尚未得到明确的结果.分析实验结果提出分离马铃薯抗青枯病相关基因的可行性方案:1)消除抑制剂的影响,建立高效的PCR反应体系;2)增加PCR引物对数量;3)采用AFLP技术分析合适的抗、感青枯病材料.
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