本文主要分成三个部分：第一部分制备了重组刺桐胰蛋白酶抑制剂并进行了活性鉴定；第二部分在大肠杆菌中表达了重组人微纤溶酶原并进行了活性测定；第三部分制备了尿激酶原变体并进行了活性鉴定。 刺桐胰蛋白酶抑制剂(ETI)是一种Kunitz型胰蛋白酶抑制剂，能够抑制胰蛋白酶及组织型纤溶酶原激活剂的活性，因此ETI可以作为配体与固定相偶联用于亲和层析。我们利用化学合成及聚合酶链式反应(PCR)的方法获得ETI的编码基因，然后用NdeI/SacI酶切并插入载体pET25b(+)中构建重组表达质粒pET25b(+)/ETI。重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后，用IPTG诱导使重组ETI(rETI)过量表达形成包涵体。包涵体经过洗涤、复性及CM离子交换柱纯化，每升培养液可获得14 mg rETI，其纯度超过92％。活性测定表明，rETI对凝血酶及尿激酶的活性没有抑制作用，但能显著抑制胰蛋白酶、瑞替普酶及纤溶酶的活性，抑制常数K分别为5.14×10<-9>，9.4×10<-8>和2.08×10<-8>mol/L。 微纤溶酶原由纤溶酶原C端261个氨基酸组成，不含有环饼区，但是保留了纤溶酶原的丝氨酸蛋白酶结构域。我们利用RT-PCR从人肝脏细胞中克隆了人微纤溶酶原基因(microplasminogen)，用表达载体pET-28a构建了重组质粒pET-28a/microplg，并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中，经IPTG诱导表达及纯化后，从每升培养液中可获得15 mg重组人微纤溶酶原(rh-microplasminogen， rh-microDlg)，其纯度超过89％。活性测定结果显示，尿激酶原(proUK)对 rh-microplg的激活速度在反应的起始阶段显著快于其对Glu-plasminogen(Glu-plg)的激活速度，随后逐渐接近。酶反应动力学数据表明，双链尿激酶(tc-UK)对rh-microplg的催化效率(k<,cat>/K<,m>)是其对Glu-plg催化效率的1.7倍。 rh-microplasmin和Lys-plasmin水解S2251的速度相近，但Lys-plasmin激活proUK的效率(K<,cat>/K<,m>)是rh-microplasmin的5.6倍。 尿激酶原作为特异性的纤溶酶原激活剂，在纤溶系统中起着极其重要的作用。我们以proUK(Lys24→Ala)/pET29a重组质粒为模板，利用顺序PCR的方法引入四个突变，构建得到了含有突变位点(Lys24→Ala，Lys47→Ala，Lvs49→Ala，Arg60→Ala，Lys62→Ala)的重组表达质粒mPUK/pET29a。然后将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中，经IPTG诱导表达及纯化后，变体蛋白mPUK纯度超过90％。酶反应动力学数据表明，plasmin催化proUK激活的效率(k<,cat>/K<,m>)是其催化mPUK激活效率的2倍；而tc-mPUK和tc-UK对plasminogen的催化效率(k<,cat>/K<,m>)在误差范围内是相近的，两者水解S2444的速度也是相同的。