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目的: 研究N6(促神经再生因子复合剂)对脊髓损伤后不同时间点注射疗效观察。 方法: 统一采用最初由Allen,s创建的重物坠落法(Weight dropping,WD法)经由NYU(NYU/MASCIS Impactor modelⅡ)脊髓碰撞器建立大鼠急性脊髓损伤模型,碰撞器重锤质量为10g,接触面直径为2mm,设计打压高度12.5mm。将SD(Sprague Dawley)大鼠随机分为3组,每组24只,共72只,即A组(对照组):A1脊髓损伤后30min内注射生理盐水治疗,6只;A2脊髓损伤后8h内注射生理盐水,6只;A3脊髓损伤后24h内注射生理盐水治疗,6只;A4脊髓损伤后48h内注射生理盐水治疗,6只;途径为椎管内蛛网膜下腔注射,生理盐水剂量25ul。B组(加强龙组):同样根据不同治疗时间点(30min内,8h内,24h内,48h内)分为B1,B2,B3,B4小组,每小组6只,每只注射剂量为30mg/kg,途径为尾静脉注射。C组(N6合剂组):同上分为C1,C2,C3,C4小组,每小组6只,每只注射剂量为25ul,注射途径为椎管内蛛网膜下腔注射。脊髓损伤并药物治疗后72h统一取材,每小组中随机选取3只行组织包埋石蜡切片,用于HE染色,观察脊髓损伤组织解剖结构,水肿、变性坏死程度,炎性细胞浸润情况等,用于免疫组化检测神经细胞中凋亡诱导蛋白Caspase-3表达以及原为末端缺口标记(Tunel法)计数凋亡阳性细胞数;另3只用于提取脊髓组织蛋白,SDS-Page凝胶电泳法检测凋亡相关蛋白bcl-2,bax,Caspase-3表达量变化;比较在相同脊髓损伤的情况下,不同时间点,不同药物治疗后脊髓损伤恢复情况。 结果: 1.免疫组化Caspase-3及Tunel阳性神经细胞计数显示,C1、C2组阳性细胞数较C3、C4阳性细胞数明显减少,P<0.05,存在统计学差异; 2.Western-blotting结果显示:bcl-2蛋白在C1、C2组中表达明显增多,较C3、C4组存在统计学差异(P<0.05);caspase-3、bax蛋白则减少,同样存在统计学差异(P<0.05); 3.免疫组化及Western-blotting结果显示:caspase-3在A1组较B1、C1增加明显,存在统计学差异。 结论: 在本项研究中,通过建立大鼠急性脊髓损伤模型,检测损伤后凋亡相关蛋白表达量的变化及计数神经细胞凋亡数,再次验证了N6复合剂对于大鼠脊髓损伤后的抑制神经细胞凋亡的治疗作用,并认为脊髓损伤后N6合剂的早期及时治疗,比拖延后的治疗,更有利于大鼠脊髓神经细胞的恢复。