目的：了解上海部分医院KPC 酶的发生及耐药情况。研究产KPC菌株的碳青霉烯类耐药机制、KPC 酶的分子生物学特性和blaKPC的转移和传播。运用RNAi 技术探讨blaKPC 表达与碳青霉烯类耐药的关系。 方法：1.在上海第六人民医院、仁济医院、瑞金医院和华山医院收集亚胺培南或美罗培南药敏结果（纸片扩散法）中介或耐药的肠杆菌科细菌，用E-TEST 方法重新测定细菌对各类抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC）。用改良Hodge 试验和硼酸抑制试验进行碳青霉烯酶表型的筛选。2.PCR 检测blaKPC、测序，PCR 检测膜孔蛋白OmpK35、OmpK36、OmpK37的编码基因。3.对产KPC 酶菌株做接合试验、质粒电泳、等电聚焦电泳、Southern blot 试验。4.化学合成SiRNAs，对blaKPC的表达进行RNA 水平的干扰，检测实验菌株干扰前后亚胺培南和厄他培南的MIC值。 结果：本研究在上海部分医院共收集到7 株对亚胺培南药敏结果（纸片扩散法）中介或耐药的肠杆菌科细菌。E-TEST 试验结果显示实验菌株对亚胺培南和厄他培南的MIC 值在4-32μg / ml，所有实验菌株对三代头孢菌素均耐药。硼酸抑制试验有5 株阳性结果，改良Hodge 试验有4株阳性结果。PCR 检测blaKPC 结果显示有2 株菌株携带blaKPC-2。PCR检测显示膜孔蛋白OmpK35 编码基因缺失。接合试验、质粒电泳、southernblot 试验显示blaKPC-2 是由一个50kb 大小的可接合性质粒携带，等电聚焦电泳显示实验菌与接合菌都有pI6.7的β-内酰胺酶。实验菌株在RNAi前后亚胺培南和厄他培南的MIC 值都是32μg / ml。 结论：1.在上海数家医院2005-2006年的临床分离株中共检测到2株产KPC-2的肠杆菌科细菌，说明KPC酶的发生率还比较低。硼酸抑制试验的敏感性要高于改良Hodge试验，阳性结果需要继续检测blaKPC。2.PCR检测blaKPC和膜孔蛋白编码基因结果证明，肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类耐药是由KPC酶合并膜孔蛋白OmpK35缺失共同引起。3.分离自上海和浙江的4株产KPC-2的肠杆菌科细菌中，blaKPC都是由1个50kb的可转移性质粒所携带。4. 国内首次运用RNAi技术研究细菌的基因表达。干扰实验显示SiRNAs虽然能在RNA水平上抑制blaKPC的表达，但对实验菌株碳青霉烯类耐药的影响不明显，证明革兰阴性杆菌对碳青霉烯类耐药由多种因素共同引起。