第一部分、角膜铜绿假单胞菌血清学分型与体外药物敏感试验　　 目的：分析角膜铜绿假单胞菌血清学分型与体外药物敏感性之间的关系　　 方法：31例铜绿假单胞菌性角膜炎患者的细菌培养标本，根掘菌体抗原(O)的不同，采用玻片凝集法进行血清学分型，分析分型特点。通过微量肉汤稀释法(参照NCCLS标准)测定7种抗生素(庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素、环丙沙星、加替沙星、头孢他定、头孢哌酮)对铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度(MIC)，分析细菌血清型与药物敏感性之间的关系。　　 结果：31株细菌共分为11个血清型，主要集中在3，6，11型，占总数的51.7％。体外药物敏感试验结果显示，铜绿假单胞菌对阿米卡星的敏感性最高(100％)，其次是妥布霉素(97％)。　　 结论：角膜来源的铜绿假单胞菌与全身其它部位来源的此种细菌血清学分型基本一致。铜绿假单胞菌对阿米卡星敏感性最高。3、6和11血清型细菌的MIC值之间统计学无显著差异。　　 第二部分、角膜铜绿假单胞菌Mult Locus Sequences Typing基因分型与血清型和MIC之间的关系　　 目的：分析角膜铜绿假单胞菌Mult Locus Sequences Typing(MLST)基因型，探讨基因型与血清型和MIC之间的关系。　　 方法：转种培养23株角膜铜绿假单胞菌，提取菌株的DNA。应用MLST官方网站(www.pubmlst.org)提供的特异性引物，PCR扩增7个看家基因内部的部分DNA序列，扩增产物测序后，提交MLST网站与相应基因的等位基因进行比较。每个看家基因的等位基因中有1个与测序结果一致，获得该菌株针对7个看家基因的等位基因谱，最后确定分离株的序列分型。应用START软件，采用UPGMA法建立进化树。同时分析英国Birmingham and Midlands眼科中心提供的14株角膜来源的铜绿假单胞菌基因型，并且与本实验的23株细菌比较异同。探讨基因型与血清型及MIC之间的关系。　　 结果：23株细菌可分为20个基因型。聚类后分为Ⅰ、Ⅱ2个类群。20株细菌在Ⅰ类群(87％)，3株细菌在Ⅱ类群。Ⅰ类群又可分为i、ii、iii亚群。ii亚群中的菌株数最多，为16株，占Ⅰ类群的87％。ii亚群中最大的两个子亚群A，B。A子亚群中有6株细菌，占ii亚群的37.5％；B子亚群有8株细菌，占ii亚群的50％。A，B子亚群细菌的MIC值之间差异无统计学意义。　　 英国Birmingham and Midlands眼科中心提供的14株角膜铜绿假单胞菌可分为13个基因型。可聚为Ⅰ、Ⅱ类群，Ⅰ类群有13株细菌，占总数的92.7％；Ⅱ类群有1株细菌。Ⅰ类群可分为i、ii亚群。i亚群有9株细菌，占总数的65％。ii亚群中有4株细菌，占总数的28.6％。　　 本实验的23株细菌与Birmingham and Midlands眼科中心提供的14株细菌，应用同样方法共同建立进化树。37株细菌可聚为2个类群，Ⅰ类群36株(97.3％)，Ⅱ类群1株。Ⅰ类群可分为i、ii亚群。i亚群12株细菌中，英国Birmingham and Midlands眼科中心的菌株8株(66.7％);ii亚群24株细菌中，本实验细菌19株(79.2％)。对比第一部分细菌血清型与此部分基因型的关系，无对应关系。　　 结论：角膜分离的铜绿假单胞菌MLST基因型较为分散。本实验23株细菌的同源性较好。A，B子亚群细菌的MIC值之间差异无统计学意义。本实验菌株与Birmingham and Midlands眼科中心菌株的基因型有所不同，在进化树上分布在不同亚群。基因型与血清型无对应关系。　　 第三部分、角膜铜绿假单胞菌基因型与临床表现之间关系的初步探讨　　 目的：回顾性分析14例铜绿假单胞菌性角膜炎患者的临床资料。初步探讨铜绿假单胞菌基因型与临床表现之间的关系。　　 方法：对2005年5月-2006年5月间北京市眼科研究所确诊且病历记录完整的14例铜绿假单胞菌性角膜炎患者的临床和实验室资料进行回顾性分析。　　 结果：14例患者(男性9例，女性5例)全部为单眼发病，平均年龄31.6岁；患者以农民和学生为主。外伤和角膜接触镜是主要的诱发因素。角膜刮片铜绿假单胞菌培养阳性率为85.7％(12/14)。临床表现为不同程度的角膜溃疡，有些伴有前房积脓。经过局部抗生素联合全身及手术治疗后，14例患者角膜溃疡愈合，留有不同程度的云翳。视力较入院时均有不同程度的提高。分离自患者的14株细菌，基因分型聚类后分布在i，ii亚群。4株细菌在i亚群，10株细菌在ii亚群。两亚群诱发角膜溃疡的程度及患者预后视力可能存在差别。　　 结论：角膜创伤和角膜接触镜是铜绿假单胞菌性角膜炎主要的诱发因素，农民和学生是两个主要的高发群体。不同类群的菌株诱发溃疡的程度，患者视力恢复情况是否有明确不同；是否与细菌的致病性有关，需进一步探讨。