单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes, LM)是一种人畜共患的食源性致病菌。该菌在3-45℃均能正常生长繁殖,使其成为冷藏食品中主要的病原菌之一。感染LM后能引起李斯特菌病,严重威胁人类身体健康和社会经济的发展。因此建立一种快速、准确、简便的检测方法具有重要意义。目前对于致病菌的检测,一般需要较复杂的样本处理及长时间的预增菌,来达到方法的检测灵敏度。本研究旨在建立一种快速简便、特异性强的单增李斯特氏菌纳米免疫磁珠富集方法,以期简化样本处理方式及缩短增菌步骤。研究以甲醛灭活破碎后的LM菌体免疫日本大耳兔,制备获得多克隆抗体。抗体纯化后,偶联羧基化的磁珠制备抗LM免疫磁珠。采用粒度分析仪和透射电子显微镜分别对偶联抗体前后磁珠粒径大小和表面形貌进行表征。比较了直接化学偶联和链霉亲和素-生物素系统两种偶联方法以及免疫磁珠的不同粒径(180nm,350nm,1150nm)对单增李斯特菌捕获效率的影响。分别对免疫磁珠添加量、孵育时间、磁分离时间等进行了优化,选择较优条件制备出高捕获率的免疫磁珠,应用于纯培养液以及牛奶中的单增李斯特菌的捕获,对照选择性平板计数法,鉴定所制备的免疫磁珠捕获单增李斯特菌的能力以及特异性。结果表明：获得的单增李斯特菌多克隆抗体的效价为640000,该多抗与单增李斯特菌菌体有较好的结合,特异性好。链霉亲和素-生物素偶联法的捕获效率约是直接偶联法的3倍；同时,粒径180nm的磁珠捕获效率明显高于另外两种粒径磁珠。根据实验优化,偶联1mg磁珠所需链霉亲和素以及抗体投放量分别为100μg、80jig。在捕获目的菌免疫磁珠用量为0.1mg,孵育时间是45min,磁分离时间是3min,捕获过程受杂菌干扰小。纯培养体系中捕获效率可达到95%。本研究成功获得了对单增李斯特菌体具有较好亲和力的兔多克隆抗体,免疫磁珠偶联以及捕获的最佳条件。本文制备的纳米免疫磁珠,在对样品中单增李斯特菌检测的前处理中表现出良好的富集能力、成本低、易操作。