人源及鼠源sPLA2-IIE蛋白以及人转录因子BRN2蛋白的结构生物学研究

来源 :中国科学院研究生院 中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zl6273008
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
分泌型磷脂酶A2作为一个成员众多的蛋白家族,参与了包括免疫应答,炎症反应,细胞的增殖、存活、迁移在内的多种生理病理过程。GroupⅡE(sPLA2-ⅡE)是该家族最新发现的成员之一。先前的研究发现,与该家族其它成员的广谱表达不同,sPLA2-ⅡE仅仅在大脑,心脏,肺部和胰腺等有限的几个组织中表达。另外还有研究表明,sPLA2-ⅡE在炎症反应中发挥着重要作用。抗菌实验表明,sPLA2-ⅡE对革兰氏阴性菌的生长存在抑制作用。然而,由于可获得的活性sPLA2-ⅡE蛋白产量很低,更深入的研究受到了较大的阻碍。本课题利用大肠杆菌表达系统成功地实现了人源和鼠源sPLA2-ⅡE蛋白的大量表达,并且通过包涵体变复性的方式实现了蛋白的纯化,获得高纯度的目的蛋白。经过一系列的酶活性质测试和圆二色谱分析,证明通过复性获得的目的蛋白具有与天然状态下获得的可溶蛋白可比的各种性质。这部分工作将会为后来对于sPLA2-ⅡE蛋白的功能学和结构学研究提供获得活性蛋白的平台。   复性磷脂水解POU家族由一系列具有POU结构域的转录因子组成。POU结构域含有两个保守的亚结构域POUs和POUH,它们中间由一段保守性较差的linker区域连接。由于linker区域的可塑性,导致相同的POU蛋白可以通过不同的四级结构与不同的DNA靶位点发生特异性结合,对下游靶点的转录进行调控。BRN2蛋白作为POU家族的成员,在中枢神经系统分化过程中起着重要作用。同时,该蛋白在黑素瘤细胞中的异常表达也受到了广泛关注。目前针对POU蛋白与DNA靶序列的结合共提出了三种序列依赖性模型,分别是PORE,MORE和NORE模型。其中NORE模型是针对BRN2蛋白分子模拟实现的,目前并没有获得晶体学数据的支持。本课题通过大肠杆菌表达系统成功的实现了BRN2蛋白DNA结合域和转录激活域-DNA结合域的可溶表达,通过亲和层析,离子交换层析和分子筛层析等方法,获得了高纯度的目的蛋白。另外,依据文献合成了3条BRN2蛋白的DNA靶序列,进行了单独蛋白与蛋白-DNA复合物的晶体筛选。目前获得了疑似晶体,有待进一步验证。  
其他文献
随着现代无线技术的不断发展,使得无线通信、遥控遥测应用技术水平得以持续提高,相应的作为空间传感器天线的功能也得到极大的扩展。微带天线以其特有的结构紧凑、易于与电路集
高速摄影机等设备作为重要的测量设备,其图像记录了目标的轨迹和姿态信息。通过对数字图像姿态判读系统的研究,本文基于序列数字图像的处理,自动化、高精度地提取出目标在图像中
岭南地区有着浓厚而悠久的地域医药文化,岭南药物以除湿败火、活血化瘀、抗菌消炎为特色。本论文选择岭南地区三种特色中药花榈木(Ormosia henynPrain)、黄根(Prismatomeris co
本论文包括两个部分:(一)t(11;17)急性早幼粒细胞白血病发病机制及其白血病起始细胞靶向治疗研究;(二)t(8;21)急性髓系白血病多步骤发病机制的临床回顾性研究:AMLl-ET09a与C-KIT基因
光学薄膜在现代工业中非常重要,在光学器件、光电子器件、半导体器件中有着广泛的应用。减反射薄膜是光学薄膜中应用范围最广的薄膜之一,对于降低器件表面的反射率,提高器件光电
时域有限差分法(FDTD)由于其具有诸多显著优点,被广泛应用于各类电磁现象的特性分析。通常,对于涉及边界或局部结构特殊的目标体的电磁问题,FDTD一般对目标结构进行亚网格划分或
HCV是引起慢性肝炎、肝硬化和肝癌的主要因素之一,其感染人群占世界人口的2%。HCV属于黄病毒科,肝炎病毒属,是一种基因组长度为9.6kb的单股正链RNA病毒,由5非编码区域、3非编码区
SnO2薄膜是一种集诸多优良性能于一体的功能材料,它具有广泛的用途;超声喷雾热分解工艺是一种在传统热分解工艺基础上发展起来的新型镀膜方法,具有低成本、高质量的优点。本文对
BRCT(BRCA1 C-terminus)结构域是DNA损伤修复系统重要的信号传导和蛋白靶向结构域。研究显示,BRCT结构域主要以单体或二联体(串联重复)的形式存在。很多BRCT结构域含有磷酸结
兰科植物可能对喀斯特地区日趋严重的石漠化和全球气候变化非常敏感。兰科植物的生理生态学性状及其对环境变化的响应研究则有助于我们认识这种敏感性,且对兰科植物的保护具有