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乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，全世界每年约有120万妇女发生乳腺癌，有50万妇女死于乳腺癌，发病率占全年各种恶性肿瘤的7％～10％，是女性恶性肿瘤中的第一位。在我国，乳腺癌的发病率虽比西方国家低，但近年来亦有上升趋势。目前，以超声及X线等为主的乳腺癌诊断方法，对早期乳腺癌的诊断尚缺乏足够的准确性和特异性。以手术、化疗及放疗为主的综合治疗又因副作用太大而在临床应用中受到诸多限制。因此，许多学者把目光投向了乳腺癌的抗体诊断及治疗。但是，无论是早期利用肿瘤细胞免疫小鼠得到的多克隆抗体，还是之后运用杂交瘤技术生产的单克隆抗体都因为抗体的特异性低或者人抗鼠免疫反应(HAMA)等原因而不适用于临床肿瘤治疗。1998年FDA正式批准人源化鼠源单克隆抗体“赫赛汀(Herceptin)”应用于临床Her-2受体阳性的乳腺癌的治疗，才为肿瘤的抗体治疗带来了新的契机。但临床上发现这种单克隆抗体仅能对30％的Her-2/neu阳性的乳腺癌患者产生抗肿瘤效果。噬菌体组合文库的构建为肿瘤的诊断及治疗提供了一种全新的方法，但目前报道的抗乳腺癌噬菌体抗体库多为鼠源性，因人抗鼠免疫反应而不适合临床运用。本文针对鼠源性单链抗体的异源性问题，利用乳腺癌患者前哨淋巴结细胞构建人源性噬菌体单链抗体库(scFv)，用以筛选人源性抗Her-2/neu的基因工程抗体，用来研制生产针对于Her-2/neu阳性乳腺癌的抗体制品。本研究主要内容及结果如下：
⑴构建了人源性轻链可变区(Vκ、Vλ)、重链可变区(VH)文库手术摘取乳腺癌患者前哨淋巴结，提取RNA，合成cDNA作为模板，用根据人天然抗体基本结构设计的引物进行PCR扩增出抗体轻、重链可变区，经电泳纯化回收后，连接T载体，转入感受态大肠杆菌DH5α，建成VH、Vκ、Vλ文库。VH两端分别带有Sfi I、BssH II酶切位点，Vκ、Vλ两端均分别带有Nhe I、Not I酶切位点。命名为pVH-T、pVκ-T、pVλ-T。
⑵设计Linker模板及引物，PCR扩增Linker，使Linker上带有Sif I、BssH II、Nhe I、Not I酶切位点，连接T载体。pCANTAB-5E本身带有Sif I、Not I酶切位点。分别用Sfi I和Not I对pCANTAB-5E和Linker-T进行酶切、连接，转入感受态大肠杆菌DH5α。通过对pCANTAB-5E的改造，构建了pCANTAB-Linker，使其上带有Sft I、BssH II、Nhe I、Not I位点。
⑶用Sft I、BssH II分别酶切pVH—T和pCANTAB-Linker，经纯化、连接、转菌后提取质粒，所得产物命名为pCANTAB-VH库，再将pCANTAB-VH和pVκ-T、pVλ-T用Nhe I、Not I酶切，经纯化、连接、转菌后提取质粒，成功的构建了pCANTAB-scFv基因文库。
⑷将pCANTAB-scFv转入感受态大肠杆菌TG1，通过噬菌体M13KO7辅助培养，离心后重悬于2×YT-AK中过夜培养，加PEG8000离心后重悬，得到单链噬菌体抗体库，使抗体片段以融合蛋白形式表达于噬菌体表面，便于后期的筛选。
⑸利用组织筛选法对噬菌体抗体库进行了初级筛选，成功筛选出了人源性Her-2/neu抗体，得到人源性抗Her-2 scFv。