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目的:检测miR-24-3p在宫颈癌细胞中的表达并探究其对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法:1)在线软件分析和实验验证miR-24-3p在不同肿瘤和正常组织以及三种宫颈癌细胞中的表达:采用tumor-miRNA-pathway在线软件分析miR-24-3p在不同肿瘤及正常组织中的表达差异,并通过qRT-PCR检测miR-24-3p在SiHa、CaSki和C33A三种宫颈癌细胞系中的表达。2)检测miR-24-3p对宫颈癌细胞SiHa和CaSki增殖、迁移和侵袭的影响:通过阳离子脂质体介导法过表达或干扰SiHa和CaSki细胞中miR-24-3p的表达后,应用CCK8试验检测细胞增殖能力的变化,Transwell试验检测细胞迁移和侵袭能力的变化。3)预测、筛选并验证miR-24-3p的靶基因:通过生物信息学方法筛选miR-24-3p的靶基因,获取靶基因集合并对其进行GO功能注释,利用Targetscan7.2找到miR-24-3p与靶基因AMOTL2的结合位点,并用双荧光素酶报告试验进行验证,再用Western blot和qRT-PCR进一步验证miR-24-3p对AMOTL2的调控作用。4)探讨miR-24-3p是否通过靶基因AMOTL2促进宫颈癌细胞增殖和迁移:将AMOTL2的小干扰RNA片段转染进宫颈癌细胞CaSki中,应用CCK8和Transwell试验分别检测AMOTL2对CaSki细胞增殖、迁移和侵袭的影响;将miR-24-3p的抑制剂单独转染或与AMOTL2的小干扰RNA片段共转染进CaSki细胞中,通过CCK8和Transwell试验分别检测细胞增殖、迁移能力的变化。5)分析并验证在宫颈癌细胞中miR-24-3p参与的信号通路:将上述的靶基因集合与Genecards中宫颈癌致病基因取交集,得到新的靶基因集合再进行KEGG信号通路富集分析,并结合文献分析,最后选取Hippo信号通路进行验证。通过阳离子脂质体介导法过表达或干扰SiHa和CaSki细胞中miR-24-3p的表达后,采用Western blot检测Hippo信号通路关键因子YAP蛋白以及磷酸化水平变化,qRT-PCR检测YAP下游效应靶基因ANKRD1、CYR61和CTGF的mRNA水平变化。6)在体内验证miR-24-3p对瘤体生长以及对AMOTL2、磷酸化YAP以及磷酸化LATS1/2的调控作用:采用裸鼠皮下成瘤模型,将对照组和干扰miR-24-3p组的CaSki细胞分别接种到5只裸鼠皮下,每隔7天测量一次瘤体的体积,35天后处死10只裸鼠并取出瘤体,瘤体固定后用石蜡包埋并切片,组织切片进行HE染色和免疫组化染色,观察靶基因AMOTL2、p-YAP和p-LATS1/2的水平变化。7)预测并筛选调控miR-24-3p的上游LncRNAs:采用starBase和DIANA数据库预测与miR-24-3p结合的LncRNAs,再在GEPIA中筛选出在宫颈癌中低表达的LncRNAs,并对其进行总体生存曲线分析。结果:1)与相应的正常组织相比,miR-24-3p在膀胱癌、食管癌、宫颈癌和黑色素瘤中高表达;miR-24-3p在SiHa和CaSki细胞中的表达水平高于C33A细胞。2)miR-24-3p促进宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭。CCK8试验和Transwell试验的结果显示:当过表达miR-24-3p后,细胞增殖、迁移和侵袭能力均高于相应对照组(P分别<0.001、0.001、0.01);当干扰miR-24-3p后,细胞增殖、迁移和侵袭能力均低于相应对照组(P分别<0.001、0.01、0.01)。体内实验时,干扰miR-24-3p组的瘤体生长速度低于对照组(P<0.05),与体外实验结论一致。3)AMOTL2是miR-24-3p的靶基因。miRDB、miRtarbase和TargetScan在线预测miR-24-3p的靶基因集合共95个基因,该基因集合GO功能注释结果显示靶基因主要参与蛋白质自身磷酸化、激酶活性的正调控、细胞压力反应调节、细胞蛋白质定位调控、生长调节和细胞增殖负向调节等20个生物学过程;该集合与靶基因预测软件starBase中programNum大于/等于7取交集,得到最优候选靶基因AMOTL2;在Targetscan7.2数据库中找到miR-24-3p与AMOTL2 3’UTR区的结合位点,该序列在人、黑猩猩和恒河猴中一致;双荧光素酶报告试验结果显示miR-24-3p与AMOTL2 3’UTR直接结合,Western blot和qRT-PCR结果显示miR-24-3p能负向调节AMOTL2蛋白水平,但对mRNA水平无明显影响;在体内实验中,干扰miR-24-3p组的AMOTL2蛋白水平高于对照组,与体外实验结果一致。4)miR-24-3p通过靶向AMOTL2促进宫颈癌细胞的增殖和迁移。干扰CaSki细胞中AMOTL2表达后,CCK8和Transwell试验结果显示细胞的增殖、迁移和侵袭能力均较对照组增强(P<0.001),提示AMOTL2是宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的负向调控因子;miR-24-3p抑制剂转染进CaSki细胞后,细胞的增殖和迁移能力减弱,而同时再敲低AMOTL2,细胞的增殖和迁移能力反而高于单独转染miR-24-3p抑制剂组(P<0.001),提示miR-24-3p通过负向调节AMOTL2实现其促宫颈癌细胞增殖和迁移的作用。5)miR-24-3p抑制宫颈癌细胞的YAP/Hippo信号通路。在Genecards数据库中检索到宫颈癌致病基因5003个,其中有36个为miR-24-3p的靶基因,这些靶基因富集在细胞凋亡、ErbB和Hippo等多种信号通路,通过Western blot和qRT-PCR试验并发现miR-24-3p抑制Hippo信号通路效应分子YAP的磷酸化,促进了YAP下游靶基因ANKRD1、CYR61和CTGF的转录。提示miR-24-3p抑制了Hippo信号通路的激活。体内实验结果也表明,干扰miR-24-3p的表达可以促进YAP和LAST1/2的磷酸化,与体外实验结果一致。6)LncRNA ILF3-AS1可能参与miR-24-3p的表达调控。starBase和DIANA数据库筛选出8个可能调控miR-24-3p的LncRNAs,它们是:MIRLET7BHG,NRSN2-AS1,GNAS-AS1,ILF3-AS1,PAXIP1-AS1,LINC00662,NEAT1和CEBPA-AS1。进一步在GEPIA数据库中发现这8个LncRNAs中的LINC00662、NEAT1和ILF3-AS1在宫颈癌中低表达;通过宫颈癌的生存曲线分析这3个LncRNAs与生存的关系时,发现只有高表达ILF3-AS1的宫颈癌患者生存期较长。结论:1)miR-24-3p具有促进宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭的作用。2)类血管动蛋白2(AMOTL2)是miR-24-3p在宫颈癌细胞中的靶基因;miR-24-3p通过直接结合并下调AMOTL2介导对宫颈癌细胞的增殖和迁移的促进作用。3)miR-24-3p抑制宫颈癌细胞的YAP/Hippo信号通路。4)LncRNA ILF3-AS1可能参与miR-24-3p的表达调控。