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流感是一种严重威胁人类和动物健康的人兽共患疾病，流感病毒跨种属感染犬必须引起我们的高度重视。研究犬流感病毒的流行病学、遗传演化和生物学特性，对犬和人类健康以及公共卫生安全具有重大意义。
为了解广州地区犬流感的流行情况，本研究从广州各宠物医院、狗场的犬群中采集鼻咽拭子和血清，进行病原学和血清学调查，分离纯化犬流感病毒。结果显示：犬流感病原学调查的阳性率为3/227(1.3％)，血清学调查阳性率为10/158(6.3%)；接种鸡胚分离获得3个毒株，初步确定为H3N2亚型的流感病毒。
为了解分离株的遗传演化情况，本研究对3个分离株的全基因组进行RT-PCR扩增、克隆、测序和遗传演化分析。结果显示：3个分离株的8个基因片段均属于亚洲犬流感病毒亚群系，与H3N2亚型的禽源流感病毒在同一个分支，病毒相应基因核苷酸序列的相似性较高、亲缘关系较近，因此可鉴定3个分离株均为H3N2亚型犬流感病毒且具有禽源流感病毒的特征，分别命名为A/canine/Guangdong/01/2009(H3N2)，A/canine/Guangdong/02/2009(H3N2)和A/canine/Guangdong/03/2009(H3N2)。对各基因片段的核苷酸与氨基酸变异情况分析发现：3株犬流感病毒的HA蛋白裂解位点处的序列均为PEKQTR↓ GLF，蛋白切割位点附近仅有2个碱性氨基酸的插入，且不是连续出现，符合低致病性流感病毒的HA蛋白裂解位点处的氨基酸序列的分子特征；NA基因没有发生任何位点的缺失，与神经氨酸酶抑制剂耐药性相关的位点均非常保守，与酶的活性相关的位点在199位发生变异(D→R)；在M2蛋白跨膜区的氨基酸位点均未发生变异，表明病毒对金刚烷胺和金刚乙胺敏感；PB2基因在627位均为E，符合禽流感病毒的特征。
为了解分离株的生物学特性，本研究对犬流感病毒部分生物学和理化特性指标进行测定。结果显示：分离株的EID50为10-2.42/0.1mL-10-3.5/0.1mL；MDT为177.6h-192h；对乙醚、氯仿、酸和热均敏感；血凝素均为热不稳定型；均能凝集公鸡、豚鼠、猪和牛的红细胞；人工滴鼻感染BALB/c小鼠均未导致小鼠出现临床症状和死亡，接种后第14d在存活小鼠血清中可检出H3亚型犬流感抗体。
本研究初步掌握了广州地区犬流感的流行情况，经病毒分离鉴定获得了3株H3N2亚型犬流感病毒并对病毒的全基因组序列进行测定，研究了犬流感病毒的部分生物学特性，为犬流感的防制奠定了基础，为犬流感疫情发生的可能性和发展趋势的研究提供一定的理论依据。