研究背景及目的:药物性牙龈增生(Drug-induced gingival overgrowth,DGO)是因长期服用某些药物引起的牙龈纤维性增生及体积增大。研究发现,导致DGO的药物主要有以下几种:抗癫痫药如苯妥英钠,免疫抑制剂如环孢素A,钙离子拮抗剂类的抗高血压药如硝苯地平、维拉帕米等。因引起DGO作用机理尚未完善论述,目前对DGO尚缺乏有效的药物治疗方法。转谷氨酰胺酶2(Transglutaminase 2,TG2)被证实在DGO患者牙龈的中表达水平明显提高。本课题拟通过检测钙离子拮抗剂诱导的增生牙龈中以及从DGO患者分离的牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblast,HGF)中TG2及TG2 相关因子如转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-p1)、α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)等的表达,来研究DGO发病过程中TG2作用及作用机制,为以干扰TG2活性为靶点的药物来防治DGO提供理论依据。方法:1、取临床健康牙龈组织及因服用硝苯地平介导的DGO的牙龈组织各3例和4例,每例组织分切为两部分,一部分组织用10%中性福尔马林液4℃C下固定,制作石蜡切片,行苏木素-伊红(hematoxylin-eosinstaining,HE)染色以及免疫组化染色,检测增生牙龈组织中FN、TGF-β1、α-SMA、TG2以及TG2催化形成的N-ε(γ-谷氨酰胺)-赖氨酸的表达,Image pro plus软件分析两组表达量的差异。2、另外一部分组织,用于酶消化组织块培养HGF。取第三代HGF,设置健康牙龈对照组和DGO组两组。在DGO组中,分别加入0、100、150μmol/LTG2的抑制剂MDC。培养24小时后,收集细胞,提取蛋白,进行Western Blot分析各组中TG2、α-SMA表达情况,ImageJ软件分析,比较组间差异。结果:1)组织学观察显示DGO的牙龈上皮层及固有层较正常牙龈增厚,DGO牙龈固有层明显的血管化生。免疫组织化学染色分析,DGO牙龈上皮及固有层中TG2阳性染色较正常牙龈明显增高,且有统计学差异(P<0.05)。在DGO牙龈靠近上皮下的结缔组织中FN阳性染色明显高于正常牙龈组织中FN的表达,上皮中未见FN阳性表达。TG2催化形成的N-ε(y-glutamyl)lysine在DGO牙龈上皮细胞表达较多,结缔组织中也有微弱表达,而健康牙龈不论是结缔组织还是上皮均未检测到表达。TGF-β1在DGO牙龈上皮和固有层中均有显著表达,明显高于健康牙龈。而成肌纤维细胞的标志因子α-SMA除在DGO及健康牙龈结缔组织的血管上皮上表达外,未见结缔组织其他细胞的表达。2)酶消化组织块培养法培养细胞,DGO来源的HGF细胞低倍镜下细胞成漩涡样排列,高倍镜下细胞呈长梭形或多角形,细胞形态趋于均匀一致且细胞核呈圆形或椭圆形,核仁明显,与健康的HGF无明显形态学差异。100ulmolL、150ulmol/L MDC处理DGO牙龈成纤维细胞后,Western blot检测TG2及SMA表达,DGO来源的HGF较健康的HGF中TG2表达明显增高,而加入抑制剂MDC组TG2表达明显降低,且具有统计学差异(P<0.05)。DGO来源的HGF较健康的HGF其α-SMA表达明显增高且有统计学差异(P<0.05),而随药物浓度达到150uM时α-SMA表达明显降低且较DGO牙龈成纤维细胞表达有统计学差异。结论:TG2在药物性牙龈组织中及培养的成纤维细胞中呈高表达,与TG2相关的FN、TGF-β1、N-ε(γ-谷氨酰胺)-赖氨酸等表达升高,提示TG2可能通过促进基质沉积和稳定细胞外基质成分而促进钙离子诱导的牙龈增生。