【摘 要】
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MYB家族转录因子(MYB transcription factor)对生物和非生物胁迫的应答研究主要集中在拟南芥、水稻、大豆等模式植物上;在葡萄上对MYB基因功能的研究也主要集中在类黄酮代谢途
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MYB家族转录因子(MYB transcription factor)对生物和非生物胁迫的应答研究主要集中在拟南芥、水稻、大豆等模式植物上;在葡萄上对MYB基因功能的研究也主要集中在类黄酮代谢途径上,抗盐途径研究较少。由于工业污染加剧,灌溉和施肥不当等原因,使得土壤盐碱化日趋加剧,严重影响葡萄的产业发展。研究葡萄MYB抗性相关基因对丰富抗盐机制和品种选育、改良具有重要意义。1.本研究以葡萄砧木“1103P”为试材,通过对108个葡萄R2R3-MYB转录因子基因进行抗盐筛选,获得了5个受盐诱导的R2R3-MYB转录因子,进化分析表明其属于不同的拟南芥R2R3-MYB亚组。这5个基因分别命名为VvMYB112、VvMYB62、VvMYB15、 VvMYB107和VvMYB87。其中VvMYB62能响应100-200mM高盐处理,此夕,VvMYB62也能被聚乙二醇(PEG6000)和低温(4℃)诱导。2.VvMYB62基因主要在拟南芥的根尖分生组织、叶和茎中表达,酵母双杂分析发现VvMYB62蛋白具有自主激活活性,不具有同源结合特性。3.在拟南芥中过量表达VvMYB62基因表明:VvMYB62基因能提高转基因拟南芥的萌芽率,增强植株的耐盐性;Na+、K+含量测定表明VvMYB62转基因拟南芥中的Na+积累量明显低于野生型,且K+含量较高,降低了Na+/K+比;过量表达VvMYB62基因上调了AtSOS1、AtSOS2、AtSOS3、AtP5CS和AtNHX1基因的表达,但AtHKT1的表达不受影响;进一步分析发现VvSOS1.VvNHX1.VvP5CS不是VvMYB62的直接靶基因,推测VvMYB62可能间接通过SOS信号途径、渗透调节和Na+的区域化来共同调控盐胁迫。4.以葡萄砧木“1103P”为材料,优化了农杆菌介导的葡萄遗传转化体系。葡萄砧木“1103P”的茎尖再生体系在C2D+0.3mg·L-16-BA培养基上生长再生率最高,选用350mg·L-1的头孢杆菌浓度能有效抑制农杆菌的生长,先用含有2mg·L-1卡那霉素筛选获得抗性苗后再转入5mg·L-1卡那霉素培养基中能提高葡萄植株的转化效率。5.通过优化的遗传转化体系,获得了潜在的转基因葡萄植株,利用荧光显微镜对其进行了初步鉴定。
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