海洋石油污染降解微生物的筛选及其降解条件研究

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随着石油开采技术的提高和石油工业的发展,海上运输量逐年增加,每年都会发生多起海洋溢油事故,导致大量石油泄露到海洋中,对海洋环境和人类生存造成极大的危害。与化学、物理方法相比,生物修复是彻底消除油污染的最重要途径。由于海水自身逆环境和石油烃疏水性的特点,使得微生物降解率低下,长期存在被污染的环境中,造成持久污染。本文通过对筛选出的石油烃降解菌降解条件优化、产生乳化剂条件优化和菌株组合来提高海水中石油烃的降解率。本论文从大连市大连湾近海岸海水中筛选出的石油烃降解菌,进行形态学观察及16SrDNA鉴定;通过三角瓶培养对该菌株进行生长条件优化,并利用气相色谱法考察优化条件下,考察菌株对石油烃降解能力;通过乳化活性测定对菌株产生乳化剂条件进行优化;通过组合菌株活菌计数等实验,验证在组合降解石油烃过程中,两种菌都对石油烃降解起作用,且能相互促进后,测定组合菌株对石油烃的降解能力,并与单菌降解石油烃结果进行比较。从大连市大连湾近海岸海水中筛选出的石油烃降解菌,鉴定该降解菌为食烷菌属(Alcanivorax sp.),命名为Alcanivorax sp. H34;在初始pH为7.0,氮源浓度为3gm,磷源浓度为4g/L条件下,最适生长温度为30℃;30℃条件下,Alcanivorax sp. H34最适生长初始pH为7,H05菌(实验室前期研究筛选的石油烃降解菌)为8;在优化的温度、初始pH条件下,Alcanivorax sp. H34氮最佳浓度分别为3g/L,H05为4g/L;在优化的温度、初始pH、氮浓度条件下,H34、H05最佳磷浓度均为3g/L;在最优的生长条件下,菌株Alcanivorax sp. H34细胞生长消耗石油烃组分平均降解率为62.1%,石油烃总降解率为56.5%、菌株H05石油烃组分平均降解率为76.3%,石油烃总降解率为72.1%;在最优的生长条件下,Alcanivorax sp. H34非生长细胞降解石油烃组分平均降解率为41.6%,石油烃总降解率为45.5%、H05菌组分平均降解率为45.7%,石油烃总降解率为48.4%;在碳源浓度为50g/L、氮源浓度为10g/L条件下,菌株Alcanivorax sp. H34和H05乳化活性最佳培养基为2216E培养基,Alcanivoraxsp.H34优化的葡萄糖浓度为50g/L、H05为70g/L时乳化效果最佳;2216E培养基中,优化葡萄糖浓度条件下,菌株Alcanivorax sp. H34和H05氮源硫酸铵浓度为10g/L时,乳化活性最佳;在最优的菌株生长条件下,组合菌株生长消耗石油烃组分平均降解率为82%,较Alcanivorax sp. H34菌提高了32%,较H05菌提高了7.5%;石油烃总降解率为79.5%,较Alcanivorax sp. H34菌提高了40.8%,较H05菌提高了10.3%;组合菌非生长细胞降解石油烃组分平均降解率为56.7%,较Alcanivorax sp. H34菌提高了36.5%,较H05菌提高了24.3%;石油烃总降解率为60.2%,较Alcanivorax sp. H34菌提高了32.3%,较H05菌提高了24.4%。
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