研究背景:　　 锌是生物体所必须的微量元素之一，人体内300多种酶和转录因子的重要组成成分，起着稳定结构、催化和调节的作用。在世界范围内，因缺锌引起的疾病发生率估计超过20％，在发展中国家锌缺乏症可能影响到了二十多亿人的健康。锌缺乏症的发生主要是由于营养不良、衰老和天生的或是获得性锌吸收障碍所导致的，而缺锌主要会导致胸腺萎缩，免疫功能障碍，感染性疾病发病率增高并伴随着着生长迟缓和内分泌功能障碍。在临床上，补锌可能是辅助治疗由缺锌引起的疾病的有效的措施之一，尤其是易感人群中儿童和老人。　　 在细胞免疫和体液免疫中，锌离子是必不可少的，缺锌会导致免疫功能紊乱，包括损伤细胞的固有免疫调节，锌在免疫系统的功能上广泛研究。体内锌平衡是通过胃肠道高度调节，但这种紧密的调节需要多种锌转运体相互协调作用。哺乳动物中，两大锌转运体基因家族参与锌在细胞内外的转运:ZIP和ZnT。由于两锌转运体基因家族在锌转运功能方面表现出相反的作用，因此锌转运体在维持细胞内外锌平衡中起到至关重要的作用。　　 近年来研究发现，ZIP2蛋白可能与人的免疫力相关，尤其是在低锌的条件下。在ZIP2基因敲除鼠中，对野生型和基因敲除鼠进行基因表达分析，发现ZIP2在免疫系统的一些未成熟的树突状细胞中活跃表达;幼儿过敏性哮喘患者血清锌明显低于正常水平，且外周血单个核细胞(PBMCs)中ZIP2 mRNA量显著高于正常人。提示ZIP2在免疫细胞中发挥一定的作用。因此，探讨在免疫细胞缺锌与ZIP2的表达水平的关系。　　 研究目的:　　 体内外探讨缺锌对儿童PBMCs中ZIP2表达的影响。将已构建成功的ZIP2表达载体转染人T淋巴细胞Jurkat，E6-1细胞株，研究ZIP2对Jurkat，E6-1细胞分泌细胞因子的影响。　　 实验方法:　　 一、临床收集20例缺锌患儿以及20例正常对照儿童和不同年龄段的正常人的抗凝外周血液样本、原子吸收分光光度计检测血清锌含量、密度梯度离心法分离样本的PBMCs，通过Real-time PCR方法检测PBMCSS锌转运体ZIP2、ZIP1、ZIP6、ZnT1mRNA表达。体外培养正常儿童的外周血单个核细胞，TPEN处理，每周检测ZIP2的表达，至第七周，探讨PBMCs体外长时间缺锌条件下对ZIP2的影响;不同浓度的TPEN处理Jurkat，E6-1细胞株12h，选择一合适的TPEN浓度。　　 二、将已构建完成的pEGFP-N1-ZIP2真核表达载体转染至人T淋巴细胞。转染36h后，TPEN处理12h转染48h后，Real-time PCR和Western-blot技术检测淋巴细胞中ZIP2mRNA和蛋白质的表达水平，然后采用Real-time PCR技术检测ZIP2过表达对其他锌转运体ZIP1、ZnT1、ZnT5、ZIP6、ZIP10及细胞因子INF-γ和IL-6 mRNA水平产生的影响;通过MTT比色法检测ZIP2对细胞增殖的影响。　　 实验结果:　　 一、低锌患儿组与正常对照儿童相比，Real-t ime PCR结果显示低锌患儿PBMCs中ZIP2的表达量明显高于正常对照组(P＜0.05);低锌患儿中，ZnT1表达量上调，ZIP1的表达量下调，而ZIP6的表达没有显著差异。不同年龄的成年人与正常儿童比，青年组中ZIP2的表达最低。体外培养的正常儿童外周血细胞，结果显示，ZIP2的表达下降后上调的。　　 二、ZIP2真核表达载体pEGFP-N1-ZIP2转染至Jurkat，E6-1细胞株后，结果显示ZIP2在Jurkat，E6-1细胞株内高表达，ZnT1mRNA表达量下调(P＜0.05)而其他锌转运体ZIP1、ZnT5、ZIP6、ZIP10mRNA表达量均没有显著改变(P＞0.05);细胞因子INF-γ的mRNA表达量上调(P＜0.05)，TPEN处理后，INF-γ的mRNA表达量下调(P＜0.05)，而IL-6的表达量没有明显改变（P＞0.05），且对细胞的增殖没有显著影响(P＞0.05)。　　 结论:　　 本研究在体内外检测了缺锌时儿童PBMCs中ZIP2的表达，结果显示缺锌上调儿童的PBMCs中ZIP2的表达，缺锌处理细胞株Jurkat，E6-1，使ZIP2表达上调，推测在缺锌状态下ZIP2在维持锌的动态平衡和免疫调节过程中起一定作用。　　 同时，将ZIP2真核表达载体pEGFP-N1-ZIP2成功转染至Jurkat，E6-1细胞株中，观察细胞株中细胞因子的分泌情况，结果发现ZIP2高表达可使细胞因子INF-γ的表达上调，IL-6的表达没有显著改变，提示ZIP2可能在淋巴细胞中扮演重要的角色。