【摘 要】
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目的分析DNA聚合酶β(DNApolβ)基因在人胃癌细胞系和组织中表达水平,初步探讨DNApolβ基因与胃癌发生、发展的关系,为发现新的肿瘤标志物,进行早期胃癌筛查提供理论依据。方法(
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目的分析DNA聚合酶β(DNApolβ)基因在人胃癌细胞系和组织中表达水平,初步探讨DNApolβ基因与胃癌发生、发展的关系,为发现新的肿瘤标志物,进行早期胃癌筛查提供理论依据。方法(1)应用PCR-SSCP及PCR-RFLP法检测12个人胃癌细胞系和107例胃癌组织及其配对正常粘膜中DNApolβT889C突变,分析该突变频率及分布规律。(2)构建原核表达载体,表达DNApolβT889C的纯合突变体及野生体,比较其生物学功能的异同。(3)应用半定量RT-PCR,检测12个细胞系及大蒜素作用后BGC823中DNApolβ、Recql5基因的表达变化规律。结果(1)检测发现12个胃癌细胞系中,来源为中国汉族人的四个胃癌细胞系,均为DNApolβT889C突变阳性,而其余8个胃癌细胞系为阴性;107对胃癌组织中,10例癌组织DNApolβT889C突变阳性,突变率为9.3%,配对正常粘膜组织突变阴性。该突变引起其编码的259位氨基酸由亮氨酸变为丝氨酸,导致其二级结构发生改变。(2)成功构建原核表达载体,并大量表达DNApolβT889C突变蛋白。(3)DNApolβ、Recq15基因在细胞系及大蒜素作用后BGC823中表达水平变化趋于一致。结论DNApolβEXON13上第889核苷酸由T变为C可能是胃癌的突变热点之一,并且此突变可能影响DNApolβ蛋白的损伤修复功能,增加对胃癌的易感性。DNApolβ、Recq15两个复制相关基因具有协同关系。
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