背景与目的:Kahn和Xu于1998年成功克隆了PAR4基因[1],并从淋巴瘤Daudi细胞中得到了它的序列,全长为4.9kb。其由385个氨基酸组成,和其它3种PARs有33%的同源性,细胞外包含一个推定的Arg/Gly丝氨酸蛋白酶切割位点, Northern blot显示PAR4的mRNA表达于人类的很多组织:肺脏上高表达,胰脏,甲状腺,睾丸及小肠亦表达;荧光原位杂交实验显示人的PAR4基因位于19p12染色体。但是PAR4在炎症及其他疾病中的确切作用及其机制还需要进一步的研究,因此我们制备廉价、有效的抗PAR-4 mAb具有重要意义。方法:以受Fmoc树脂保护PAR-4特异性合成多肽(13肽)为免疫原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。通过间接ELISA法筛选可特异性分泌抗PAR-4 mAb的杂交瘤细胞;采用capture ELISA法鉴定mAb的Ig亚类;通过ELISA、Dot blot、免疫组织化学染色法、流式细胞分析、激光共聚焦扫描显微镜技术鉴定mAb的特异性。结果:结果:获得3株可稳定分泌抗PAR4 mAb的杂交瘤细胞,其分泌的mAb均为IgM;免疫组化染色表明,mAb将人结肠组织中的腺上皮细胞、疑似肥大细胞和淋巴细胞,扁桃体中的淋巴细胞和包皮组织中的肥大细胞染成褐色;流式细胞术分析显示,3株mAb与A549细胞的PAR4均呈阳性反应;激光共聚焦扫描显微镜观察,荧光标记的阳性反应物主要位于A549细胞的胞浆和胞膜上。结论:成功地制备抗PAR4 mAb,为血液疾病、变态反应性疾病和炎症性疾病的研究工作提供了有用的试剂。