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研究背景及目的胰腺癌发病隐匿、进展快、预后极差。最新资料表明,胰腺癌的发病率逐年攀升,发病率和病死率在中国人群中均处于前十位,其中位生存时间不足6个月,同时大部分病人在诊断时已发生转移失去手术机会。因此,寻找与胰腺癌转移、预后相关的蛋白标记迫在眉睫。整合素通路作为参与细胞侵袭转移的重要通路,在本课题组前期结合CIPHER、现有数据库及文献检索三种方法进行的初步信息学预测中,结果显示Talin-1、β1及β3整合素分子作为整合素通路中重要的功能蛋白可能均与胰腺癌患者预后密切相关。Talin-1是一种存在于细胞质中的蛋白,由头部(talin head)及体部(talin rod)两部分构成,是调控细胞膜上整合素蛋白功能的重要分子。Talin-1蛋白可与整合素β亚基胞内段的特定序列结合,从而激活整合素蛋白,增强其与细胞外基质成分的结合能力,同时Talin-1蛋白的体部一方面可以募集肌动蛋白(actin)、黏着斑蛋白(vinculin)等一系列蛋白以调控细胞骨架的形成,影响细胞的运动能力,并通过调控黏着斑激酶(FAK)、SRC等细胞因子,从而对细胞的多条信号通路产生影响。现阶段已有实验证明,Talin-1蛋白的表达水平与前列腺癌、乳腺癌、肝癌、口腔鳞癌、卵巢癌等多种癌症密切相关,研究表明其主要是通过调控如β1整合素分子、β3整合素分子等整合素蛋白发挥作用,同时Talin-1还表现出了组织特异性的特点。而在胰腺癌方面,Talin-1与患者临床指标、预后以及相关机制方面的研究尚处空白。本研究拟通过组织芯片技术及体外细胞实验对胰腺癌中Talin-1表达与各项临床指标间的关系以及其对胰腺癌细胞生物学行为的影响及相关机制进行初步研究。研究内容1.研究胰腺癌组织中Talin-1蛋白的表达情况及与胰腺癌病人临床特征及预后的关系。2.研究不同胰腺癌细胞株细胞中Talin-1的表达及对胰腺癌细胞株细胞增殖、凋亡、粘附、侵袭及迁移的影响。3.研究Talin-1影响胰腺癌细胞生物学行为的相关机制。方法：1.应用免疫组织化学技术(Immunohistochemistry, IHC)检测及对比分析手术切除经病理诊断为胰腺癌及癌旁组织的标本中Talin-1、β1整合素分子、β3整合素分子的表达情况,分析三者与胰腺癌临床病理特点及胰腺癌患者预后的关系。2. RT-PCR及Western blot技术检测各胰腺癌细胞株细胞中Talin-1的基础表达情况。应用siRNA转染技术敲低高表达细胞株中的Talin-1表达,并设置相应的对照组。CCK8法以及EdU法检测Talin-1对胰腺癌细胞增殖的影响；利用流式细胞术检测细胞周期及凋亡；利用Fibronectin包被培养皿检测Talin-1对细胞与外基质粘附能力的影响；利用transwell法检测Talin-1对胰腺癌细胞侵袭及转移的关系；3.利用共转染技术同时敲低Talin-1与β3整合素分子表达,并设置仅敲低β3整合素分子表达的对照组,进而对细胞的增殖、凋亡、粘附、迁移以及侵袭能力进行检测及对比分析。结果：1.与癌旁正常导管细胞相比,Talin-1在人胰腺癌组织的细胞浆中呈低表达,并与胰腺癌的肿瘤位置显著相关,在β1整合素分子高表达亚组中,Talin-1表达与N分期显著相关；在β1整合素分子以及β 3整合素分子高表达亚组中,Talin-1表达与患者总生存时间显著相关,同时在β 3整合素分子高表达亚组中,Talin-1表达是影响胰腺癌患者总生存时间的独立因素。2. Talin-1的高表达能够显著提升胰腺癌细胞株PANC-1的增殖以及与外基质间的粘附能力,同时抑制其侵袭及迁移能力。3.在β 3整合素分子表达受到抑制的情况下,Talin-1的高表达同样能够显著提升胰腺癌细胞株PANC-1的增殖以及与外基质间的粘附能力,然而相较于未抑制β3整合素分子时Talin-1高表达对胰腺癌细胞迁移及侵袭能力的抑制作用,在β 3整合素分子受抑制的情况下,Talin-1的表达水平对于细胞的迁移能力并没有显著性影响,甚至其高表达反而能够促进细胞的侵袭。结论：Talin-1在β1整合素分子以及β3整合素分子高表达的情况下与胰腺癌患者的临床预后显著相关；Talin-1可促进胰腺癌细胞增殖以及与外基质间的粘附,同时其在β 3整合素分子的协同作用下能够抑制细胞的侵袭与迁移；Talin-1蛋白并非单一通过与β3整合素分子的协同作用影响胰腺癌细胞的生物学行为。