【摘 要】
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硫代葡萄糖甙(简称硫甙)是植物体内一类由不同氨基酸衍生而来的含硫代谢物,维持正常硫甙水平是植物的一种自我保护机制,硫甙在芥子酶的作用下会生成对动物有毒的代谢物,影响
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硫代葡萄糖甙(简称硫甙)是植物体内一类由不同氨基酸衍生而来的含硫代谢物,维持正常硫甙水平是植物的一种自我保护机制,硫甙在芥子酶的作用下会生成对动物有毒的代谢物,影响其作为饲料的价值,降低种子硫甙是油菜育种的主要目标之一。Thiohydroximate S-glucosyltransferase(S-GT)是催化硫甙核心结构合成途径中的一个关键酶。
在本研究中以甘蓝型高硫甙油菜(B.napus L.cv.hubu 11)和海甘蓝基因组DNA为模板,克隆了甘蓝型油菜和海甘蓝中硫甙合成关键酶S-GT基因全长序列,序列比较结果表明所克隆甘蓝型油菜S-GT序列除带有一个173bp的内含子外,与发表的油菜序列仅49个碱基不同,相似性高达96.5%;与发表的油菜序列相比,所克隆海甘蓝S-GT序列,除74 bp的内含子部分外有92个碱基的差别,相似性亦高达93.4%。根据获得的基因序列设计引物扩增出S-GT基因序列相同但是带有不同酶切位点的两个片段,将两个片段反向插入到带有本实验所构建的种子特异表达载体内含子的两端,成功构建了油菜和海甘蓝S-GT基因的种子特异性hpRNAi载体pCambia2300-nap-hpBnSGT-Intron和pCambia2300-nap-hpCaSGT-intron。同时构建了海甘蓝S-GT基因的超量表达载体pCambia2300sn-CaSGT。进行了农杆菌介导的遗传转化,抗性筛选和PCR初步鉴定,经过室内炼苗后移栽大田。
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