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乙烯合成限速酶是调控乙烯生物合成的关键酶,其主要功能是限制前体物质ACC的合成,进一步影响乙烯的生物合成。乙烯是高等植物体内源激素,在植物的生长发育过程中发挥广泛的作用。同时在呼吸跃变型果实中触发了果实呼吸跃变的开始,促进了果实的成熟衰老,加速果实品质的下降。本课题组前期研究发现‘无核白’中的乙烯合成限速酶基因VvACS1在果梗中具有最高的表达水平。本研究以欧洲葡萄(Vitis vinifera L.)品种‘红地球’和‘无核白’的花药、子房及小花蕾为材料,在愈伤组织诱导培养基PIV、MS1上培养获得胚性愈伤组织,然后用农杆菌介导的遗传转化方法,将欧洲葡萄‘无核白’中克隆得到的VvACS1基因构建过表达载体,转入无核白葡萄受体材料中,并验证VvACS1基因功能。本研究还对比了不同培养条件及品种葡萄体细胞胚发生的效率。具体内容及取得的成果如下:1.诱导得到无核白和红地球胚性愈伤组织。以无核白和红地球的花药、子房和小花蕾为外植体,在MS1培养基(MS+3%蔗糖+1 mg/L 2,4-D+2 mg/L 6-BA+3 g/L植物凝胶)上培养得到胚性愈伤组织。2.对诱导培养基进行改良,发现在CIM6培养基(MS+3%蔗糖+0.5 mg/L 2,4-D+4 mg/L6-BA+1.0 mg/L pic+3 g/L植物凝胶),发现1.0 mg/L毒莠定的添加有助于提高胚性愈伤组织诱导率。3.获得了无核白葡萄的VvACS1转基因株系。采用农杆菌介导法,将携带欧洲葡萄‘无核白’VvACS1基因的过表达载体转入欧洲葡萄无核白的胚性愈伤组织中,并对抗性株系进行PCR检测,验证VvACS1基因被成功整合到受体材料基因组中,获得了34个转基因的无核白葡萄株系。4.选取转基因株系和野生型以内参基因GAPDH进行qRT-PCR。结果表明在转基因株系中,乙烯合成限速酶基因表达量有所不同,部分株系VvACS1基因相对表达量提高。5.在部分转基因株系中,根系生长较野生型植株受到抑制,其叶片VvACS1基因表达量明显增加或叶片ACS酶活和乙烯释放速率显著增加。