农杆菌介导法将转录因子ABP9转化大豆及遗传转化条件优化研究

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wj3852
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大豆是重要的油料作物和饲料作物,也是人类的主要食用蛋白和工业原料的来源。近些年随着我国水土资源的严重流失,土地荒漠化不断扩大,大豆的生产受干旱、盐害等不利因素的影响,产量很不稳定,产品已远远不能自给。因此,通过基因工程手段提高大豆抗逆性,在理论和生产上具有重要意义。 已有研究从玉米中鉴定了过氧化氢酶CATI基因启动子应答ABA信号的顺式元件ABRE,克隆了与之特异性结合的转录因子ABP9基因;将ABP9克隆到质粒中构建了植物组成型表达载体pCRl20-35S-ABP9,并证明了ABP9的表达可以提高植物对干旱、盐害等产生的氧化逆境的抗性。 本研究利用含有表达载体pCR120-35S-ABP9的农杆菌EHA105,以大豆子叶节为外植体,用农杆菌介导法转化大豆,以期获得抗逆性提高的转基因大豆;同时对农杆菌介导的大豆遗传转化系统条件进行优化,为提高大豆遗传转化效率提供依据。研究发现,合丰25、黑农35、争光1号等品种再生能力较强;升汞灭菌法对种子的伤害大于氯气薰蒸灭菌法;培养基中加入L-半胱氨酸可提高抗性丛生芽获得率,并在各培养阶段没有共同促进和累积抑制作用;外植体对光照和氧气条件很敏感,并且对氧气的敏感程度要大于光照;植物激素对丛生芽伸长影响的重要性依次为ZT、GA<,3>、IAA和6-BA,最优浓度配比为:6-BA 1.5mg/L,GA<,3>0.75mg/L,IAA 0.1mg/L,ZT 1.0mg/L;利用优化后的转化条件,共获得8株转基因再生植株,经PCR检测和序列分析,4株为阳性,转化率为1.33%。
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