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目的:建立人子宫内膜间质细胞hESC体外培养模型,研究孕激素作用下hESC中 moesin的表达,以及着床因子IL-1β的表达变化,探讨孕激素对hESC细胞骨架调节蛋白及着床因子的调节作用,为胚胎着床、子宫内膜容受性建立及分化提供理论依据。
方法:从因“子宫肌瘤”行全子宫切除术的妇女子宫标本中获得分泌期子宫内膜组织,分离、纯化、鉴定后建立人类子宫内膜间质细胞(hESC)体外模型。根据细胞培养液中添加激素不同分组:孕激素组(P10-5mol/l)、雌孕激素组(E210-8mol/l+P10-5mol/l)及米非司酮联合雌孕激素组(E210-8mol/l+P10-5mol/l+Mif10-5 mol/l)及空白对照组。共培养三天后应用细胞化学免疫荧光法和免疫印迹法检测moesin蛋白定位和定量的变化,用ELISA方法检测细胞上清液中IL-1β的浓度。各组数据之间的比较采用单因素方差分析。
结果:⑴细胞化学免疫荧光检测发现moesin主要分布于hESC的细胞胞浆及胞膜,少数出现在细胞核中,各实验组和对照组moesin定位无明显变化。免疫印迹法发现孕激素组hESC中moesin蛋白表达显著高于对照组(P<0.05);雌孕激素组moesin蛋白也表达上调(P<0.05);雌孕激素组和孕激素组moesin表达无显著性差异(P>0.05);米非司酮联合雌孕激素组hESC中moesin蛋白较雌孕激素组表达显著降低(P<0.05)。⑵孕激素组和雌孕激素组hESC细胞上清液中IL-1β浓度显著低于空白对照组(P<0.05);而米非司酮联合雌孕激素组hESC细胞上清液中IL-1β浓度显著高于雌孕激素组(P<0.05)。
结论:①孕激素促进hESC的moesin表达上调,米非司酮通过拮抗孕激素作用,抑制hESC moesin上调,提示moesin可能通过调节细胞骨架重塑介导胚胎着床。②孕激素抑制hESC IL-1β分泌,米非司酮拮抗孕激素作用,促进IL-1β分泌,推测孕激素抑制IL-1β分泌利于子宫内膜容受性的建立及hESC分化。