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卵巢卵泡的生长发育状态好坏直接决定了母猪繁殖性能的高低,颗粒细胞功能影响着卵泡的生长与闭锁,研究发现,KISS1在卵巢组织中可以促进卵泡的发育,影响颗粒细胞的功能,但KISS1在猪卵巢颗粒细胞中的表达调控机制及其细胞功能仍不清楚。本研究主要以长大二元杂母猪为研究对象,以猪的卵巢颗粒细胞为模型,首先研究KISS1自身的表达调控机制,进而研究该机制对颗粒细胞功能的影响,为完善KISS1在猪颗粒细胞中的表达调控提供分子依据,为解析影响长大二元杂母猪卵巢卵泡的生长、发育与成熟的因素提供分子基础。本研究主要通过qRT-PCR检测母猪排卵过程中的卵巢组织中KISS1的mRNA水平变化,扩增KISS1启动子区,构建含有KISS1启动子区缺失片段的重组载体,双荧光系统分析KISS1启动子区缺失片段的活性;生物信息学分析与ChIP验证KISS1启动子区潜在结合的转录因子,构建转录因子的超表达载体和siRNA,通过双荧光系统、qRT-PCR、Western Blot技术分析转录因子对KISS1转录活性、mRNA和蛋白水平的影响。构建KISS1的超表达载体和siRNA,转染进颗粒细胞,FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit with PI检测颗粒细胞的凋亡情况,使用ELISA检测颗粒细胞上清中E2的浓度变化,使用qRT-PCR技术检测KISS1对E2合成相关因子、受体基因和PI3K通路基因的mRNA表达变化,确定KISS1在猪颗粒细胞的功能;本研究的主要结果如下:(1)猪卵巢组织中KISS1的mRNA在P2时的表达水平显著高于P1和P3。(2)PCR扩增得到KISS1启动子区-2261~+221共2482 bp,双荧光素酶系统分析得出-850~289 bp区域存在负向调控元件的结合位点。(3)转录因子预测网站预测和ChIP验证结果表明,转录因子STAT4和CEBPα分别特异性的结合在KISS1的-309~-297和-744~-733区域。(4)超表达STAT4和CEBPα后,KISS1启动子的转录活性降低,mRNA和蛋白表达水平显著降低;干扰STAT4和CEBPα的表达后,KISS1的mRNA和蛋白表达水平显著上升,颗粒细胞中E2的浓度降低。(5)超表达KISS1后,颗粒细胞的凋亡率降低,细胞上清中E2的浓度显著上升,ESR1和ESR2的mRNA表达水平显著上升;干扰KISS1的表达后,颗粒细胞的凋亡率升高,E2的浓度下降,Star、CYP17、3B-HSD、17B-HSD、CYP19A、ESR1和ESR2的mRNA表达水平显著下降。(6)超表达KISS1后,PIK3CG、PI3CI和PDK的mRNA表达水平显著上升,FOXO3、TSC2和BAD的mRNA表达水平显著下降;干扰KISS1的表达后,PIK3CG、PI3CI、PDK、FOXO3、TSC2和BAD的mRNA表达水平下降,但差异不显著。由上述结果,本研究主要获得以下的结论:转录因子STAT4和CEBPα可以通过抑制KISS1的表达从而抑制KISS1对颗粒细胞分泌E2的促进作用。