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前列腺素（Prostaglandins,PGs）是哺乳动物体内广泛存在的一种局部激素，影响到哺乳动物生殖生理的各个环节，包括：排卵、着床、分娩、黄体溶解等。牛输卵管中主要存在PGE2和PGF2α，其对输卵管内容物的输送、精子和卵子的结合以及早期胚胎发育均发挥着重要的生理作用。本研究以奶牛输卵管上皮细胞为研究对象，探讨了雌激素（Estrogen,E2），对奶牛输卵管上皮细胞合成分泌PGE2和PGF2α及其受体的调控作用，具体研究内容如下： 1.奶牛输卵管上皮细胞的PGs受体分析 采用荧光定量PCR法检测奶牛输卵管上皮细胞PGs受体的种类，采用荧光探针法和ELISA法分别检测PGs对奶牛输卵管上皮细胞内Ca2+浓度和cAMP浓度的影响，进而推断PGs受体的生理功能性的存在。结果显示，奶牛输卵管上皮细胞中存在EP1、EP2、EP4、DP、FP和TP受体，其中EP2、EP4、DP受体表达量较高，而EP1、FP、TP表达量较低。 2.E2对PGE2和PGF2a合成分泌及其受体的调控作用 采用荧光定量PCR法检测E2对奶牛输卵管上皮细胞PGs合成酶以及PGs受体表达的调控作用，采用In cellwestern blot法进一步证明定量PCR的结果，并采用ELISA法检测E2对PGE2和PGF2α分泌的影响。结果显示，E2引起COX-2的表达在2小时内快速升高（P<0.01），并引起PGE2和PGF2α分泌量增多（P<0.05），8小时后COX-2表达的显著下降（P<0.01）以及COX-1表达的增高（P<0.01）引起PGE2：PGF2α比值的升高；mPGES-1的表达在4小时内快速升高（P<0.01），随后降低；mPGES-2与cPGES的表达不受到E2的影响；PGFS的表达在8小时后显著升高（P<0.01）；CBR1的表达在8小时时有所升高（P<0.05）；EP2和EP4受体的表达分别在4小时和48小时明显升高（P<0.05）；FP受体的表达在4小时明显降低（P<0.05），在48小时又明显升高（P<0.05）。 3.PGs对自身合成分泌的调控作用 采用荧光定量PCR法检测PGs受体激动剂butaprost（EP2受体激动剂）和fluprostenol（FP受体激动剂）对PGs合成酶及PGs受体基因表达的调控。结果显示，butaprost可引起COX-2的表达在2小时内快速升高（P<0.01），随后降低；COX-1的表达在24小时后显著升高（P<0.01）；mPGES-1的表达在8小时内显著降低（P<0.01），mPGES-2和cPGES的表达不受butaprost的影响；PGFS的表达在4小时内显著升高（P<0.01）；CBR1的表达不受butaprost的影响；EP2和EP4受体的表达分别在2小时和48小时明显升高（P<0.05）；FP受体的表达在8小时和48小时明显升高（P<0.05）。 fluprostenol可引起COX-2的表达在4小时内快速升高（P<0.01），随后降低；COX-1的表达不受fluprostenol的影响；mPGES-1的表达在8小时后显著降低（P<0.01），mPGES-2和cPGES的表达不受fluprostenol的影响；PGFS的表达在4小时内显著升高（P<0.01）；CBR1的表达不受fluprostenol的影响；EP2受体的表达在16小时内显著降低（ P<0.01）；EP4受体的表达在8小时内显著降低（P<0.01）；FP受体的表达在2小时内明显降低（P<0.05），8小时后明显升高（P<0.05）。 本研究的主要结论如下： 1.奶牛输卵管上皮细胞存在EP1、EP2、EP4、DP、FP和TP受体，并介导着PGs在输卵管上皮细胞的生殖生理作用。 2.E2可快速引起奶牛输卵管上皮细胞PGE2和PGF2α短期分泌的增多，并可引起PGE2：PGF2α比值的增高。 3.E2可引起EP2、EP4和FP受体表达量的增高。 4.PGE2和PGF2α对其自身分泌起到了正调控。