背景:　　肺癌目前在世界范围已经上升到第一高发的恶性肿瘤。非小细胞肺癌是较典型的由驱动基因发生发展的瘤种，在以精确治疗为目标的当代，通过特异性靶向调控这些基因可导致肺癌生长停滞和凋亡，显著延长患者生存。目前肺癌的靶向治疗已使部分患者明显获益。mTOR信号通路在细胞中调控重要活动，如蛋白质翻译、转录、调控细胞周期、细胞生长、增殖、分化、生存，以及能量代谢、细胞自噬和应激反应。在非小细胞肺癌中，mTOR信号激活关系着肿瘤RTK抑制剂耐药、化疗耐药及免疫逃逸等机制。　　最近发现，microRNA（miRNA）在肿瘤的起源、发生、发展中显现出调节生物信号通路的作用，miRNAs在调节mTOR信号通路，抑制肿瘤进展中起关键作用，提示miRNA是新的靶点或新的治疗方法。　　新发现的miR-1271在人类胚胎干细胞中的ARL10基因第二个内含子转录编码区被识别的低拷贝数小RNA，发现它在胃癌、乳癌、肝癌、卵巢癌及头颈部肿瘤中能抑制不同靶基因，抑制肿瘤生长、浸润和转移。miR-1271与miR-96为旁系同源，近期报道miR-96能在前列腺癌中靶向抑制mTOR，但miR-1271对非小细胞肺癌的作用并不明确，是否能在非小细胞肺癌中调节mTOR国内外未见报道。　　目的:　　本研究旨在了解miR-1271在非小细胞肺癌中的水平，验证mTOR在非小细胞肺癌中高表达，研究miR-1271对mTOR的调节及其机制，对非小细胞肺癌生存、生长的影响。为今后在非小细胞肺癌的治疗中提供新的靶点及手段提供理论依据。　　用生物信息学预测mTOR-3’UTR是否为 miR-1271靶基因，查询miRanda方法　　取31例非小细胞肺癌肿瘤组织及配对的癌旁正常组织标本，用Western blot方法检测肿瘤组织与癌旁组织中的mTOR蛋白表达水平，同时用RT-qPCR方法检测肿瘤组织及癌旁组织中miR-1271表达水平。(Http://www.microrna.org/microrna/home.do)，和target Scan(http://www.targetscan.org)，确定miR-1271与mTOR3’UTR mRNA的互补碱基序列。应用带有目的基因miR-1271、反义序列as-miR-1271及对照组随机序列scr的腺相关病毒转染A549细胞，病毒携带绿色荧光蛋白（GFP）和荧光素酶报告基因。成功转染后，得到 A549-miR-1271、A549-as-miR-1271、A549-scr三个稳定细胞株。RT-qPCR检测miR-1271在三个细胞株中的表达。mTOR-3’UTR携带荧光素酶质粒分别转染 A549-miR-1271，A549-scr和A549-as-miR-1271，检测三个细胞株的荧光表达，了解miR-1271与mTOR的结合情况以及证明miR-1271与mTOR的调控关系。　　RT-qPCR方法检测A549-miR-1271，A549-scr和A549-as-miR-1271细胞株中mTOR的表达水平，了解miR-1271对mTOR转录水平的影响，并且用Western blot方法检测三细胞株的mTOR蛋白表达水平，了解miR-1271对mTOR翻译水平的影响。为了解miR-1271对mTOR的抑制对非小细胞肺癌细胞的影响，体外实验用MTT方法检测了A549-miR-1271，A549-scr和A549-as-miR-1271细胞株的增殖情况。体内实验用生物发光成像系统检测 A549-miR-1271，A549-scr和A549-as-miR-1271细胞负瘤小鼠的非小细胞肺癌瘤体的生长和荧光量的变化。　　统计方法：　　所有数据分析使用SPSS17.0统计软件，计量资料用（mean±SD）表示，差异显著性采用配对t检验；计数资料用卡方χ2检验，Fisher’s精确检验；p<0.05，差异显著。二变量间相关分析用Spearman系数。5′我们用生物信息查询，miR-1271与mTOR结合的靶序列位于第918位-924位，序列为AUCAGAAUAAUUUUUGUGCCAAU3′mTOR3′-UTR(918-924)　　结果:　　31例非小细胞肺癌肿瘤组织及癌旁正常组织标本中，mTOR在肿瘤中明显高表达（p=0.000），而对应的miR-1271在肿瘤组织中较癌旁正常组织明显低表达（p<0.05），并且miR-1271表达水平与mTOR蛋白表达水平呈负相关关系(R=-0.81;p<0.0001)。　　3′ACUCACGAACGAUCCACGGUUC5′miR-1271为了验证mTOR是miR-1271的靶基因，以及证实miR-1271与mTORmRNA结合后的功能改变，经过用带有目的基因 miR-1271、反义序列as-miR-1271及对照组随机序列scr的腺相关病毒转染A549细胞后，我们获得携带绿色荧光（GFP）和荧光素酶报告的稳定细胞株A549-miR-1271,A549-as-miR-1271和A549-scr。用RT-qPCR检测miR-1271在A549-miR-1271，A549-as-miR-1271和A549-scr中的水平，发现miR-1271在A549-miR-1271中水平明显增高，而在A549-as-miR-1271中显著降低，证明获得稳定的符合研究需要的细胞株。又用mTOR-3’UTR携带荧光素酶的质粒分别转染A549-miR-1271，A549-scr和A549-as-miR-1271细胞，检测三个细胞株的荧光素酶表达，应用荧光素酶报告系统确定mTOR是miR-1271的靶基因，能互相结合，并且A549-as-miR-1271组细胞的荧光量较对照组明显增高，而A549-miR-1271组细胞的荧光量较对照组明显降低。不但验证了生物信息学预测的结合序列，而且证实miR-1271负调控mTOR。　　在明确非小细胞癌中miR-1271调控mTOR的方式实验中发现：miR-1271没有影响mTOR的转录水平，而影响了mTOR的翻译，无论我们使miR-1271在非小细胞肺癌细胞中过表达则mTOR的蛋白表达减少，抑或我们抑制miR-1271表达,则增加了 mTOR的蛋白表达水平。数据显示：miR-1271是通过抑制蛋白的翻译来调控mTOR。进一步研究发现，在体外实验用MTT方法检测A549-miR-1271，A549-scr和A549-as-miR-1271三细胞株的增殖试验中，发现反义序列组A549-as-miR-1271（即miR-1271低水平）细胞较对照组A549-scr细胞明显增长迅速，实验组A549-miR-1271细胞（miR-1271过表达）较对照组A549-scr细胞明显增速缓慢。提示A549-miR-1271可能通过抑制mTOR的蛋白表达，抑制了A549的生长。　　体内实验发现同样 A549-miR-1271（miR-1271过表达）在小鼠体内该细胞株成瘤较其他组明显小，抑制了非小细胞肺癌的生长，可能的机制是 miR-1271抑制了mTOR的蛋白翻译。　　结论:　　miR-1271在非小细胞肺癌中低表达，mTOR是miR-1271在非小细胞肺癌中的靶基因，在非小细胞肺癌中miR-1271与mTOR有强烈的负相关关系。提示两者可能有调控关系。在非小细胞肺癌细胞中，miR-1271仅改变mTOR蛋白表达水平，当miR-1271高表达时mTOR蛋白则低表达，miR-1271低表达时mTOR蛋白则高表达，miR-1271调控了mTOR的翻译水平而非转录水平的调节，体内体外实验均证明miR-1271抑制非小细胞肺癌的生长，可能机制是miR-1271抑制了mTOR，继而抑制非小细胞肺癌的生长。