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甲状腺癌目前已成为最常见的恶性内分泌系统肿瘤之一,其发病率按3%逐年上升。甲状腺乳头状癌(Papillary thyroid carcinoma,PTC)是甲状腺癌中最常见的病理类型,约占85%左右。目前我国主要通过手术为主的综合治疗方式治疗甲状腺乳头状癌,但仍有部分患者在术后出现甲状腺乳头状癌细胞向周围淋巴组织浸润转移,且成为甲状腺癌患者死亡的主要原因。上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是指具有极性的细胞获得间质表型,丢失上皮表型,进而增强移动和侵袭能力的过程。研究表明,甲状腺癌细胞出现浸润转移与上皮间质转化其密切相关。因此,寻找参与调节甲状腺癌细胞EMT进程的标志物尤为重要。三叶因子3(TFF3)是三叶因子家族肽中的一员。近年来有学者指出TFF3可能是潜在的癌基因。然而,有关TFF3是否参与甲状腺乳头状癌EMT这一过程鲜有文献报道。课题组前期实验发现TFF3在PTC中高表达;并成功筛选出稳定降低TFF3表达的TPC-1细胞株(sh RNA-TFF3-TPC-1)及转染空质粒载体的TPC-1细胞株(sh RNAC-TPC-1)。本研究拟在前期实验结果上,探讨TFF3对甲状腺乳头状癌细胞TPC-1细胞株EMT的影响及其侵袭转移的作用机制。首先通过免疫组织化学技术检测甲状腺乳头状癌组织芯片中癌组织与癌旁组织中TFF3和Snail的表达情况。统计分析Snail表达与临床资料如病理分期、肿瘤大小及淋巴结转移情况间的相关性。统计分析TFF3与Snail表达的相关性。然后通过细胞划痕实验检测沉默TFF3后甲状腺乳头状癌细胞sh RNA-TFF3-TPC-1细胞株(sh RNA-TFF3)、sh RNAC-TPC-1细胞株(sh RNAC)和TPC-1细胞株迁移运动能力变化;Transwell侵袭实验检测沉默TFF3后甲状腺乳头状癌细胞sh RNA-TFF3-TPC-1细胞株(sh RNA-TFF3)、sh RNAC-TPC-1细胞株(sh RNAC)和TPC-1细胞株侵袭能力变化;克隆形成实验检测沉默TFF3后甲状腺乳头状癌细胞sh RNA-TFF3-TPC-1细胞株(sh RNA-TFF3)、sh RNAC-TPC-1细胞株(sh RNAC)和TPC-1细胞株克隆形成能力变化。最后通过实时定量PCR实验检测sh RNA-TFF3-TPC-1细胞株(sh RNA-TFF3)、sh RNAC-TPC-1细胞株(sh RNAC)和TPC-1细胞株中EMT标志物(Snail、Slug、E-cadherin、N-cadherin)m RNA转录水平的变化;免疫细胞化学染色实验分别检测sh RNA-TFF3-TPC-1细胞株(sh RNA-TFF3)、sh RNAC-TPC-1细胞株(sh RNAC)和TPC-1细胞株中EMT标志物(Snail、Slug、E-cadherin、N-cadherin)及MAPK通路相关蛋白ERK1/2的变化;免疫印迹技术实验检测sh RNA-TFF3-TPC-1细胞株(sh RNA-TFF3)、sh RNAC-TPC-1细胞株(sh RNAC)和TPC-1细胞株中EMT标志物(Snail、Slug、E-cadherin、N-cadherin)及MAPK通路相关蛋白ERK1/2和p-ERK1/2的变化。结果显示:TFF3在PTC中高表达,癌旁组织中阴性/低表达;Snail在PTC中高表达,癌旁组织中阴性/低表达。Snail积分吸光度值为0.5331±0.0190 vs 0.0976±0.0026(P<0.001),TFF3积分吸光度值为0.4614±0.1031 vs 0.0812±0.006(P<0.001)。Snail表达与临床病理分期(P=0.007,r=0.6978),肿瘤大小(P=0.002,r=0.738),淋巴结转移(P=0.037,r=0.651)呈正相关;Snail与TFF3表达高度相关(P=0.001,r=0.8006)。细胞划痕实验结果显示,沉默TFF3表达后,与TPC-1和sh RNAC-TPC-1组相比,sh RNA-TFF3-TPC-1细胞株细胞迁移能力下降。TPC-1组与sh RNAC-TPC-1组迁移能力无统计学差异;侵袭实验结果显示,sh RNA-TFF3-TPC-1组OD值较sh RNAC-TPC-1组与TPC-1组明显降低。TPC-1组与sh RNAC-TPC-1组侵袭能力无统计学差异;细胞克隆形成实验结果显示,与sh RNAC-TPC-1组(493±32)与TPC-1组(478±35)相比,sh RNA-TFF3-TPC-1组细胞克隆数(106±20)明显下降。TPC-1组与sh RNAC-TPC-1组细胞克隆形成能力无统计学差异。免疫细胞化学实验结果表明,sh RNA-TFF3-TPC-1组Snail、Slug、N-cadherin、ERK1/2表达下调,E-cadherin表达上调。sh RNAC-TPC-1组Snail、Slug、N-cadherin、ERK1/2表达上调,E-cadherin表达下调。TPC-1组Snail、Slug、N-cadherin、ERK1/2表达上调,E-cadherin表达下调。实时定量PCR实验结果及免疫印迹技实验结果显示sh RNA-TFF3组Snail、Slug、N-cadherin m RNA水平降低,E-cadherin m RNA表达上调。TPC-1组与sh RNAC-TPC-1组Snail、Slug、N-cadherin和E-cadherin m RNA变化水平无统计学差异;免疫印迹技实验结果显示sh RNA-TFF3组Snail、Slug、N-cadherin、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达水平下降,E-cadherin蛋白表达水平增强。TPC-1组与sh RNAC-TPC-1组Snail、Slug、N-cadherin、E-cadherin、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白水平无统计学差异。实验结果表明:TFF3与甲状腺乳头状癌迁移侵袭转移有关;沉默TFF3可以降低甲状腺乳头状癌细胞TPC-1细胞株迁移能力、侵袭能力、克隆形成能力。TFF3可能通过MAPK信号通路调节甲状腺乳头癌细胞TPC-1细胞EMT进程。