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肿瘤抑制蛋白p53是维持基因组稳定性和抑制细胞恶性转化的一个重要蛋白。在半数以上的肿瘤中p53基因发生突变,其它具有野生型p53的肿瘤通常伴随有p53通路的其它调节成分的突变。因此,p53通路的失活是肿瘤发生的一个普遍事件。在细胞受到DNA损伤、原癌基因激活、染色体复制异常、低氧、营养缺乏等刺激条件下,p53被迅速激活而稳定,介导细胞周期阻滞和凋亡的能力显著增强。P53蛋白的稳定性受到多个信号途径的严密调控。MDM2是p53最重要的一个负调控因子,它可以直接结合并泛素化p53,多聚泛素化的p53被蛋白酶体识别并降解。
我们通过差异表达的方法发现RLIM基因在肝癌组织中显著下调表达。来自免疫组化染色半定量分析染色半定量分析、RT-PCR和WesternBlot等方法检测的结果均显示RLIM在绝大多数肝癌组织中呈下调表达。RLIM是一个含有RING结构域的泛素E3连接酶,文献中报道它可以通过蛋白酶体途径降解某些LIM-HD转录因子或辅因子,如CLIM、LM02/LM04、RLIM等。我们发现RLIM可以在荧光报告系统中特异性激活p53信号通路,增强p53蛋白的稳定性,促进p53依赖性的细胞凋亡和生长抑制。还证明RLIM可以和p53结合并促进p53的体内或体外泛素化,但体内较弱的泛素化能力不能显著下调p53蛋白的稳定性。我们还发现RLIM可以直接结合MDM2,并降低MDM2蛋白的稳定性。RLIM作为一个泛素E3连接酶,可以直接泛素MDM2,我们鉴定了RLIM对MDM2的泛素化位点在N端,与文献报道MDM2自身泛素化位点在C端不相重叠,这种泛素化作用是单向,MDM2不能泛素化RLIM。此外,RLIM还有非依赖于E3连接酶活性的正向调节p53作用。消减内源RLIM时可以部分地抑制Uv照射引起的细胞凋亡。并且RLIM可以被DNA损伤相关激酶—Chk1磷酸化,提示RLIM调控p53的作用可能受到上游通路的影响。通过这项研究,我们发现RLIM是一个单向负调节MDM2的E3连接酶,并初步证明它参与了UV刺激调节p53稳定性地信号传导通路。