AXBP1是我们通过酵母双杂交筛选得到的一个全新的与体轴抑制因子Axin1相互作用的蛋白,序列分析发现其N端具有一个保守的RWD结构域和一个保守的RING结构域,因而我们认为AXBP1属于锌指蛋白家族,是一种RING型锌指蛋白。本次研究以斑马鱼(Danio rerio)为实验模型从基因结构、表达谱、功能分析等方面研究了 AXBP1在胚胎发育过程中的作用。首先我们将酵母双杂交得到的人的AXBP1的氨基酸序列在NCBI数据库做序列比对,得到一个与其同源的斑马鱼AXBP1基因序列,并根据该序列设计引物克隆得到全长的zAXBP1。通过整胚原位杂交实验对zAXBP1在斑马鱼胚胎中的表达谱进行了分析,我们发现zAXBP1在斑马鱼胚胎发育的各个阶段都有表达:原肠胚期在体轴区域富集表达,并随着发育不断延伸,随后在胚胎躯干部位广泛的表达,这说明zAXBP1在斑马鱼整个胚胎发育过程中都起到一定的作用,尤其是与原肠运动和体轴的形成、发育有关。进一步实验证明过表达和敲低zAXBP1均能造成斑马鱼体轴、肌节发育的异常。此外,我们发现过表达和敲低zAXBP1 的斑马鱼胚胎中,标志基因 noggin、chordin、gsc、hgg1、dlx3、ntl 的表达水平和表达区域均发生显著变化,说明zAXBP1能够影响斑马鱼的原肠运动,并且通过对汇聚延伸运动的影响进而影响斑马鱼体轴的形成和发育。在对zAXBP1功能域进行精确定位时,我们发现RING结构域可能与延伸运动有关,而RWD结构域可能与汇聚运动有关。更重要的是我们发现AXBP1作用的发挥与其泛素化连接酶活性有关,这为找寻zAXBP1功能的分子机制指明了方向。另外我们还证实了,AXBP1能够抑制与斑马鱼汇聚延伸运动密切相关的Rho GTPases蛋白Rac1的泛素化降解。综上,本次研究证实AXBP1对斑马鱼胚胎发育过程中细胞运动,体轴、肌节的形成和发育具有重要的作用,初步揭示了 AXBP1起作用的结构域和活性位点,为我们进一步研究AXBP1的分子机理奠定了基础。