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胰岛移植是治疗Ⅰ型糖尿病的最有效方法之一。为解决胰岛来源不足,进行异种间胰岛移植的研究是治疗Ⅰ型糖尿病的研究热点,而猪胰岛被认为是人类胰岛供体的最佳来源。本试验为探讨不同日龄猪胰腺胰岛分离纯化技术,以出生1d、60 d、120 d、165-180 d猪为试验动物,采用胰管注射法、histopaque纯化法、酶联免疫吸附试验及组织学、免疫组织化学技术等进行胰腺胰岛的分离纯化试验。结果表明,猪胰腺胰岛获取量与不同胶原酶消化时间0 min、15 min、30 min和45 min各组间均差异显著(P<0.05)；胰岛获取量与不同浓度胶原酶1.0 mg/ml、1.5 mg/ml、2.0 mg/ml各组间均差异显著(P<0.05)；在相同的消化时间(15 min)条件下,1d和60 d采取胶原酶浓度为1.0 mg/ml,120 d和165-180 d胶原酶浓度为1.5 mg/ml条件下分离纯化,1d猪胰岛分离3045±986个／g,纯化后2421±438个／g,纯化度为78%,存活率为92%；60 d猪胰岛分离2567±873个／g,纯化后1938±362个/g,纯度为74%,存活率94%；120 d龄猪胰岛分离1969±547个/g,纯化后1562±236个/g,纯度为79%,存活率90%；165-180 d龄猪胰岛分离1758±125个/g,纯化后1485±119个/g,纯度为84%存活率为92%；1d胰岛素释放量高糖组为788.56±77.53 mIU/胰岛,低糖组为158.37±28.44 mIU/胰岛；165-180 d猪胰岛素释放量高糖组为679.58±68.69 mIU/胰岛,低糖组为102.43±23.12 mIU/胰岛；显微镜下HE染色测量结果1d猪胰岛直径一般为35±10μm,60 d猪胰岛直径一般为62±20μm,120 d龄猪胰岛直径一般为94±30 μm,165-180 d猪胰岛直径一般为158±60μm；DTZ染色测量结果1d猪胰岛直径一般为33±9μm,60 d猪胰岛直径一般为64±20 μm,120 d龄猪胰岛直径一般为91±32 μm,165-180 d猪胰岛直径一般为143±54μm。由此可知,出生后不同阶段猪胰腺胰岛分离纯化的条件存在差异,1 d、60 d猪胰岛分离纯化的最佳条件为热缺血时间小于10min、冷缺血时间小于30 min、胶原酶V浓度为1.0 mg/ml、消化时间为15 min,而120 d、165-180 d日龄猪胰岛分离纯化最佳条件为热缺血时间小于10 min、冷缺血时间小于30 min、胶原酶V浓度为1.5 mg/ml、消化时间为15 min。1 d和120 d长白猪胰岛分化能力、胰岛数量及胰岛释放量优于120 d和165-180 d长白猪。