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翼首草系川续断科翼首花属植物,全世界翼首花属植物约有25种,主要分布于地中海、亚洲中部及非洲。我国仅有匙叶翼首草Pterocephalus hookeri(C.B.Clarke)Hoeck和裂叶翼首草Pterocephalus bretschneidri(Bat.)Pritz.两种,以根或全草入药,为藏医常用药材,广泛应用于藏药制剂,如十二味翼首散、洁白丸、二十五味甘子丸、二十五味驴血丸、二十六味余甘子丸、九味青鹏散、石榴普安散、清肺止咳丸等。藏医认为翼首草性寒、味苦、有小毒,具有清热解毒、祛风湿、止痛的作用,可用于治疗瘟毒、痹证、痢疾、关节炎等症。研究表明,翼首草中含有大量的齐墩果烷型五环三萜皂苷类化合物,其具有显著的生物活性,主要表现为抗炎、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、保肝、降糖、降脂等。目前,国内对翼首草总皂苷的提取分离纯化工艺未见报道,因此其提取、纯化工艺的研究显得尤为必要。本研究旨在此方面作一探索,为翼首草药材的综合利用和开发奠定基础。本文进行了香草醛-高氯酸比色法测定翼首草总皂苷含量的方法学考察;用单因素和正交设计实验优选了翼首草总皂苷的醇回流提取工艺条件;比较了DM130、DM301、X-5、HPD-100、AB-8五种型号的大孔树脂对翼首草总皂苷的吸附、洗脱性能并优选出AB-8型大孔树脂作为翼首草总皂苷纯化富集的载体,对其吸附、洗脱翼首草总皂苷的吸附性能和洗脱参数进行了考察;进行了翼首草总皂苷提取纯化的实验室放大工艺考察,建立了翼首草总皂苷的质量评价体系;对翼首草总皂苷进行了体外抗肿瘤作用的初步药效学研究。其研究的结果如下:
1.建立了翼首草总皂苷的分光光度分析法。采用香草醛.高氯酸比色法,检测波长为545nm,以齐墩果酸(Oleanolic Acid,OA)为对照品,在15.05～90.3 μg范围内对照品的量与吸光度呈良好的线性关系。回归方程为A=0.0098C-0.0335,r=0.9988(n=6),回收率在100.08％～101.87％之间。该方法具有较高的回收率,稳定性、精密度和重复性较好。采用此方法可对翼首草总皂苷含量进行简便、快速的测定。
2.考察了翼首草总皂苷的醇回流提取工艺,通过单因素和L9(34)正交实验确定了醇回流提取翼首草总皂苷的适宜工艺参数:乙醇浓度80％、固液比1∶10、提取次数3次、提取时间1 h、提取温度80℃,翼首草总皂苷的平均得率7.54％,相对标准偏差RSD=0.44％。
3.比较了DM130、DM301、X-5、HPD-100、AB-8五种型号的大孔树脂对翼首草总皂苷的吸附、洗脱性能并优选出AB-8型树脂作为翼首草总皂苷纯化富集的载体,研究和分析了AB-8型树脂对翼首草总皂苷的吸附和洗脱性能。结果表明,AB-8型树脂适于翼首草总皂苷的分离和精制,饱和吸附量为25.8 mg/ml湿树脂,吸附条件为:上样液pH值9.00、上样流速1.5 BV/h、药材树脂用量比1∶2;解吸条件为5 BV去离子水洗去水溶性杂质,然后用5 BV的80％乙醇解吸,洗脱流速均为2 BV/h,可较好的分离翼首草总皂苷。
4.进行了翼首草总皂苷提取纯化实验室放大工艺的考察,建立了翼首草总皂苷的质量评价体系。
5.采用MTT法测定翼首草总皂苷对BGC-823(人胃癌细胞)、BEL-7402(人肝癌细胞)、B16(小鼠黑色素瘤)三种肿瘤细胞株的生长抑制率,结果显示:翼首草总皂苷对三种肿瘤细胞株均具有明显的抑瘤效应。