甜菜碱对孕前灌酒雌鼠早期植入前胚胎H3K9乙酰化水平的影响

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胚胎发育受环境影响表现在妊娠过程中的任何环节,包括配子形成、胚胎发育、胎儿成熟等各种时期。女性长期过度饮酒,其后代会出现发育迟缓,身体畸形及精神行为异常等病症的几率大大增加。本实验采用体内冲胚法及体外胚胎培养技术获取各组卵母细胞及各期植入前胚胎,并使用亮甲酚蓝染色法及免疫荧光技术对各组卵母细胞活性和早期植入前胚胎H3K9乙酰化水平进行研究。同时也对各组实验动物肝脏及血清中的丙二醛(MDA)含量进行测定,以期为研究“胎儿酒精综合症"(FASD)的发病机理及人类优生优育提供一定的借鉴和参考。实验分组如下:对照组,摄入等剂量生理盐水;灌酒组Ⅰ,摄入20%酒精;甜菜碱组Ⅰ,摄入20%酒精+甜菜碱;灌酒组Ⅱ,摄入40%酒精;甜菜碱组Ⅱ,摄入40%酒精+甜菜碱。实验结果:1.甜菜碱组血清中的MDA含量低于灌酒组,高于对照组,且灌酒组ⅡMDA含量高于灌酒组Ⅰ,均差异显著(P<0.05);2.用26umol/1的亮甲酚蓝对雌鼠未成熟卵母细胞染色后,结果显示,与对照组相比,实验组小鼠未成熟卵母细胞G6PD活性降低,同时灌酒组下降幅度略高于甜菜碱组,差异不显著;3.各组MII期卵母细胞均未检测到H3K9乙酰化间接免疫荧光:体内灌酒组Ⅰ在桑葚胚期H3K9乙酰化水平高于对照组,囊胚期结果则相反;体外灌酒组Ⅰ各期胚胎H3K9乙酰化水平与对照组相比无明显差异,且两组各胚胎期H3K9乙酰化水平变化趋势基本相同;灌酒组Ⅱ植入前胚胎H3K9乙酰化水平与灌酒组Ⅰ相比,变化较大;甜菜碱对20%灌酒雌鼠早期植入前胚胎H3K9乙酰化水平干预程度较大,其体内、外大多数胚胎期的H3K9乙酰化水平均降低了。实验结论:1.丙二醛是脂质过氧化的中间产物,该指标能反映外源因子对机体的氧化损伤程度。灌酒组肝脏及血清中MDA含量上升,说明雌鼠长期过量饮酒可能会导致机体氧化还原系统失衡,肝脏及血清系统均受到了不同程度的氧化损伤;甜菜碱组小鼠肝脏和血清中MDA含量降低,说明甜菜碱缓解了酒精在机体内造成的的氧化应激,具有明显的抗氧化功能,但血清中甜菜碱组MDA含量均显著低于对照组;2.孕前雌鼠酒精摄入后其未成熟卵母细胞的G6PD活性降低了,且酒精浓度越大,活性越低,这可能与女性过度饮酒对生殖细胞产生了不利影响有关;甜菜碱可提高孕前酒精摄入雌鼠未成熟卵母细胞G6PD的活性;3.酒精对雌鼠早期植入前胚胎H3K9乙酰化水平的影响有剂量依赖性,酒精浓度越高,影响越大。甜菜碱可在一定程度上缓解酒精对雌鼠早期植入前胚胎H3K9乙酰化水平的影响;该研究或可为揭示雌鼠酒精摄入对胚胎发育的影响提供一些参考数据。
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