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目的：初步探讨自体脐带血血清（humanumbilicalcordbloodserum，hCBS）培养对人羊膜间充质干细胞（humanamnioticmesenchymalstemcells，hAMSCs）增殖、表面分子和某些特征性蛋白表达的影响，为hAMSCs用于细胞治疗提供优化的培养体系奠定基础。方法：采用胰蛋白酶-胶原酶分离法分离hAMSCs，运用差速贴壁和传代培养纯化hAMSCs，制各自体hCBS，用10％hCBS加LG-DMEM培养基培养hAMSCs，观察原代和传至1-3代培养的hAMSCs生长情况；流式细胞仪分析hAMSCs的表型和细胞周期；台盼蓝拒染法计数活细胞，绘制hAMSCs生长曲线；RTreal-timePCR检测波形蛋白、CK18、Alb、AFP、Oct-4和NanogmRNA表达，HE染色观察细胞形态学变化；免疫细胞化学观察波形蛋白、CK18、Alb的蛋白表达。结果：hCBS原代培养hAMSCs，48h贴壁，hAMSCs培养5d，细胞融合达80％以上。hAMSCs传代培养，24h内贴壁，每3d换液1次，传代的细胞生长曲线呈S型，于第3-6d处于指数生长期，平均倍增时间为32h。流式细胞术检测显示，第3代hAMSCs的细胞周期主要集中于G0-G1期，细胞增殖指数为（24.8±4.3）％。第1至第3代hAMSCs均表达CD44+、CD29+、CD73+和CD166+，而基本不表达CD34和CD45；与第1代比，第2-3代hAMSCs表达CD44+、CD29+细胞数有增加趋势。RTreal-timePCR检测显示，第3代hAMSCs高表达波形蛋白和AFPmRNA，低表达Alb、CK18mRNA，同时还有Oct-4和NanogmRNA的表达。免疫细胞化学染色和苏木素复染，显微镜下观察显示，第3代hAMSCs纯度较高，高表达波形蛋白，低表达Alb和CK18蛋白。结论：新建立的hCBS培养体系由LG-DMEM和10％hCBS组成，可用于hAMSCs的培养，能较好地保持hAMSCs的增殖能力，维持其干细胞的细胞周期分布的特点；该体系传代培养第1-3代的hAMSCs能表达间充质干细胞的表面分子，即CD44+、CD29+、CD73+和CD166+，不表达CD34和CD45；第3代hAMSCs纯度较高，除表达间充质细胞和干细胞标志波形蛋白、Oct-4和NanogmRNA外，还表达肝细胞的标志Alb、CK18和AFP。hCBS培养体系能否保持hAMSCs的分化潜能，是否优于传统的胎牛血清培养体系值得进一步深入研究。